MiR20a和miR20b對FIP200的調(diào)控及其對乳腺癌細胞自噬的作用研究.pdf

1、R e s e a r c h o n m i R 2 0 a a n d m i I 也O b m o d u l a t i n gF I P 2 0 0 a n di t sr o l ei na u t o p h a g y o f b r e a s tc a n c e r c e U sA T h e s i sS u b m i t t e d t oS o u t h e a s t U n i V e r s 時F

2、 o r t h e A c a d e m i c D e g r e e o f M a s t e r o f S c i e n c eB YQ i a n g Q i a nS u p e r v i s e d b yL iS h u f e n gA s s o c i a t e P r o f - e s s o rI n s t i t u t eo f L i f eS c i e n c e sS o u t h

3、 e a s t U n i V e r s i t yA p r ’2 0 1 5中文摘要m 眥0 a 和m i R 2 0 b 對F I P 2 0 0 的調(diào)控及其對乳腺癌細胞自噬的作用研究中文摘要目的：細胞自噬( A u t o p h a g y ) 是真核細胞特有的生命現(xiàn)象，是高度保守的自我消化過程，在維持正常細胞的內(nèi)穩(wěn)態(tài)及細胞內(nèi)蛋白質(zhì)代謝的平衡中發(fā)揮著重要的作用。F I P 2 0 0( f o c a la d h e s

4、 i o n b n a S e 丘l I I l 訂yi m e r a c t i n g p m t e i n o f 2 0 0 k D ) ，是分子量大小為2 0 0 l ①的黏著斑激酶家族相互作用蛋白。F I P 2 0 0 是細胞自噬起始復(fù)合蛋白中的一個重要調(diào)控蛋白。U L K l ．A t g l 3 ．F I P 2 0 0 復(fù)合體在細胞自噬起始過程中起著重要作用?！癱 r o R N A 是一類高度保守、長度很短的

5、非編碼調(diào)控單鏈R N A ，約1 8 —2 4 個核苷酸，通過與目標(biāo)m R N A 互補配對導(dǎo)致m R N A 降解或抑制轉(zhuǎn)錄后翻譯誘導(dǎo)基因沉默。m i R N A 參與生命活動中多步重要進程，包括發(fā)育、分化、器官形成、衰老、凋亡、增殖、和癌癥的發(fā)生發(fā)展。目前，尚未有研究報道m(xù) i c r o R N A 對F I P 2 0 0 的作用，本課題研究通過篩選靶向于F I P 2 0 0 的m i r c o R N A ，并探討后者與乳

6、腺癌細胞自噬的作用，闡明乳腺癌細胞中m i I 礬A 與F I P 2 0 0的關(guān)系。方法：( 1 ) 篩選和鑒定直接調(diào)控F I P 2 0 0 表達的m i R N A ：為篩選出靶向于F I P 2 0 0 的m i c r o R N A s ，本項目采用生物信息學(xué)軟件，分別有T a r g e t S c a I l 、P i c l 打和m i R a J l d a ，根據(jù)多個軟件預(yù)測出靶向于F I P 2 0 0 的m i

7、 c r o R N A s ，選出共同預(yù)測到的1 0 個m i c r o R N A s ；采用p c D N A 6 ．2 一G w ／E m G F P —m i R 載體分別構(gòu)建以上1 0 個m i c r o R N A s ，采用s i C H E C K T M 一2d u a l l u c i f e r a S er e p o r t e rp l a S m i d 載體構(gòu)建F I P 2 0 03 ’U T

8、R 和F I P 2 0 03 ’U T RM u t a n t 表達載體，將F I P 2 0 0 ．3 ’U T R 和m i c r o I W A 表達載體共轉(zhuǎn)染乳腺癌細胞M C F 7 、M D B ．M A ．2 3 l ，肺癌細胞A 5 4 9 ，宮頸癌細胞H e l a ，肝癌細胞H e p G 2 ，通過雙螢光報告系統(tǒng)在不同細胞中隨機驗證篩選出下調(diào)F I P 2 0 0 的m i c r o R N A s 共3 個

9、：m i R 2 0 a 、m i R 2 0 b 和m i R 3 0 2 a ，進一步W 色s t e m 結(jié)果顯示過表達這些m i I 塒A 可以顯著降低F I P 2 0 0 蛋白表達的有兩個：m i I 也O a 和m i I 匕0 b 。( 2 ) 進一步確認篩選出的m i R N A s 對細胞自噬的調(diào)控：r n j c r o l ⅢA s 的過表達，驗證F I P 2 0 0 的下調(diào)是否會抑制細胞自噬水平，本研究建立雷