溶血磷脂酸對(duì)體外培養(yǎng)星形膠質(zhì)細(xì)胞增殖和血腦屏障模型通透性影響及其機(jī)制研究.pdf

1、目的：了解溶血磷脂酸(LPA)對(duì)體外星形膠質(zhì)細(xì)胞(AS)增殖和血腦屏障(BBB)模型通透性改變的影響，并探討其可能機(jī)制。 方法：1、AS隨機(jī)分為空白對(duì)照組、小劑量二辛烷甘油焦磷酸鹽(DGPP)組、大劑量DGPP組、百曰咳毒素(PTX)組、LPA組、大劑量DGPP+LPA組、小劑量DGPP+LPA組和PTX+LPA組；MTT和流式細(xì)胞儀(FCM)檢測(cè)AS增殖，鬼筆環(huán)肽(Phalloidin)檢測(cè)AS胞內(nèi)F-actin變化；2、為探

2、討LPA促AS增殖機(jī)制，將AS隨機(jī)分為空白對(duì)照組、R031-8220組、佛波脂(PMA)組、LPA組、Ro31-8220+PMA組和Ro31-8220+LPA組；同前法檢測(cè)AS增殖和細(xì)胞內(nèi)F-actin變化，F(xiàn)ura-2/AM檢測(cè)細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，Western Blot檢測(cè)AS內(nèi)蛋白激酶C-αPKC-α)和低氧誘導(dǎo)因子-1α(HIF-1α)的表達(dá)；3、為了解LPA對(duì)血腦屏障(BBB)通透性影響，將體外培養(yǎng)的BBB模型分為空白對(duì)照組、L

3、PA組和Ro31-8220+LPA組；γ計(jì)數(shù)儀檢測(cè)BBB模型對(duì)<'125>I-牛血清白蛋白(<'125>I-BSA)的通過率，電子顯微鏡觀察血腦屏障-緊密連接(BBB-TJ)改變，Phalloidin檢測(cè)F-actin變化，F(xiàn)CM檢測(cè)PKC-α陽性細(xì)胞比例，Western Blot檢測(cè)BBB-TJ內(nèi)claudin-5表達(dá)。 結(jié)果：1、LPA可使AS存活率以及S期細(xì)胞比例增加，AS形態(tài)改變，且以10 μmol/L濃度LPA效果最佳

4、；2、DGPP和PTX預(yù)處理可降低AS存活率以及S期細(xì)胞比例，與LPA組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)，但大劑量DGPP+LPA組較小劑量DGPP+LPA組抑制作用明顯(P<0.01)；3、LPA促使AS內(nèi)[Ca<'2+>]<,i>濃度、PKC-α以及HIF-1α表達(dá)增加，與空白對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)；R031-8220+LPA組除HIF-α表達(dá)仍增加外，[Ca<'2+>]<,i>濃度和PKC-α表達(dá)均減少，與LPA組

5、比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)；4、LPA可使BBB模型<'125>I-BSA通過率和PKC-α表達(dá)增加，claudin-5表達(dá)減少，與空白對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P<0.01)，同時(shí)LPA使BBB-TJ開放，細(xì)胞內(nèi)F-actin重組；而Ro31-8220預(yù)處理后，LPA的上述能力均有所減弱。 結(jié)論：1、LPA經(jīng)LPA<,1/3>G<,i/o>蛋白偶聯(lián)受體促進(jìn)AS增殖和形態(tài)改變，其機(jī)制可能與PKC-α/Ca<'2+>信號(hào)途徑以