橙皮素和柚皮素對(duì)血管內(nèi)皮細(xì)胞NO分泌功能影響的研究.pdf

1、血管內(nèi)皮細(xì)胞產(chǎn)生的一氧化氮(nitric oxide，NO)在調(diào)節(jié)血管舒縮、維持凝血一溶栓平衡方面扮演著重要的角色．內(nèi)皮細(xì)胞NO分泌不足或失活是血管內(nèi)皮功能紊亂的主要特征之一，也是導(dǎo)致心血管疾病發(fā)生發(fā)展的重要病理事件。中藥枳實(shí)具有促進(jìn)血液循環(huán)的作用，但相關(guān)的藥理活性物質(zhì)并不明確。橙皮素(hesperetin)和柚皮素(naringenin)及其糖苷是枳實(shí)中含量最高的黃酮類成分(10％左右)。曾有報(bào)道稱其具有雌激素樣活性，而雌激素具有促進(jìn)

2、內(nèi)皮細(xì)胞分泌NO的作用，因此，我們推測(cè)枳實(shí)促進(jìn)血液循環(huán)的作用與橙皮素和柚皮素有關(guān)。為了證實(shí)上述假說，本文開展了以下研究工作： 觀察了橙皮素和柚皮素對(duì)人乳腺癌McF-7細(xì)胞的促增殖作用。在去除培養(yǎng)液中內(nèi)源性雌激素的情況下，橙皮素和柚皮素明顯促進(jìn)MCF-7細(xì)胞的增殖，在50uM的濃度下顯示與雌二醇(E2，10nm)相近的作用效果。雌激素受體拮抗劑ICll82，780和4-羥基-他莫昔芬(TAM)能夠分別完全和部分抑制橙皮素和柚皮素的

3、促增殖作用。同時(shí)，橙皮素和柚皮素能部分拮抗E2的促增殖作用，說明橙皮素和柚皮素具有雌激素樣活性。但是，當(dāng)內(nèi)源性雌激素水平較高時(shí)，橙皮素和柚皮素可能通過競爭性抑制作用部分拮抗E2的活性，因而表現(xiàn)出一定的抗雌激素樣作用效果。采用報(bào)告基因模型對(duì)這兩個(gè)化合物的進(jìn)一步研究發(fā)現(xiàn)，橙皮素和柚皮素均能誘導(dǎo)ERn控制的報(bào)告基因的表達(dá)，但僅有柚皮素，而不是橙皮素能激活ERB，這一現(xiàn)象說明這兩種化合物對(duì)ER亞型的激活具有選擇性。 觀察了橙皮素和柚皮素

4、對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞’NO分泌功能的影響。采用DAN熒光法測(cè)定培養(yǎng)液中亞硝酸鹽的含量，間接反映內(nèi)皮細(xì)胞分泌NO的水平。研究發(fā)現(xiàn)，在消除培養(yǎng)液中內(nèi)源性雌激素的情況下，橙皮素在12.5uM-100uM濃度范圍內(nèi)顯著促進(jìn)血管內(nèi)皮細(xì)胞分泌NO。且呈量效關(guān)系，但柚皮素在此濃度范圍內(nèi)幾乎無此活性。ICll82,780和TAM能夠分別完全和輕微抑制橙皮素的作用，同時(shí)，在含常規(guī)血清的培養(yǎng)條件下，橙皮素和柚皮素能降低內(nèi)皮細(xì)胞分泌NO的水平，說明橙皮素的促N

5、O分泌作用與雌激素受體激活作用有關(guān)。在不同的內(nèi)源性雌激素水平條件下，橙皮素或促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞NO分泌或減少內(nèi)皮細(xì)胞分泌NO，揭示此化合物在調(diào)節(jié)內(nèi)皮細(xì)胞NO分泌功能方面具有雙向調(diào)節(jié)作用。 采用鈣離子熒光指示劑觀察橙皮素和柚皮素對(duì)人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)鈣離子水平的影響，并運(yùn)用Westem blot技術(shù)測(cè)定了這兩個(gè)化合物對(duì)內(nèi)皮型一氧化氮合酶(eNOS)蛋白表達(dá)的影響。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，橙皮素和柚皮素均能夠快速升高人臍靜脈內(nèi)皮細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度，但只

6、有橙皮素能夠增加eN0s的蛋白表達(dá)水平。此外，基因轉(zhuǎn)錄抑制劑放線菌素D能抑制橙皮素的促內(nèi)皮細(xì)胞NO分泌作用，這說明橙皮素促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分泌NO涉及eN0s的轉(zhuǎn)錄和表達(dá)調(diào)節(jié)。柚皮素雖然能激活雌激素受體，但不能誘導(dǎo)eNOS表達(dá)的增加，其原因還有待進(jìn)一步研究。 綜上所述，橙皮素和柚皮素均屬于雌激素樣活性物質(zhì)，但在內(nèi)源性雌激素水平較高時(shí)，顯示抗雌激素樣作用。其中，只有橙皮素能在雌激素水平不足的情況下促進(jìn)內(nèi)皮細(xì)胞分泌NO，此效應(yīng)涉及eNOS