羥基喜樹堿對大鼠肝星狀細胞增殖與凋亡的影響.pdf

1、目的：探討羥基喜樹堿（HCPT）對體外培養(yǎng)的大鼠肝星狀細胞（HSC）和大鼠正常肝細胞增殖的影響，確定HCPT對HSC增殖抑制的最佳濃度；觀察HCPT對HSC凋亡的影響。為進一步研究HCPT的抗肝纖維化作用奠定細胞生物學的實驗基礎(chǔ)；為拓寬喜樹堿的臨床應(yīng)用范圍提供理論基礎(chǔ)和實驗依據(jù)。 方法：大鼠肝星狀細胞株（HSC-T6）和大鼠正常肝細胞株（BRL-3A）分別在實驗組（分別以含HCPT濃度為0.008，0.016，0.031，0.0

2、63，0.125，0.25，0.5，1，2，4，8，16，32 mg/L的培養(yǎng)液作用）和對照組（單純培養(yǎng)）中體外培養(yǎng)24 h，48 h，72 h。應(yīng)用四甲基偶氮唑鹽法（MTT法）檢測細胞增殖情況，確定HCPT對HSC-T6細胞增殖抑制的最佳濃度；流式細胞術(shù)檢測HCPT對HSC-T6細胞凋亡的影響；透射電鏡下觀察HSC-T6細胞凋亡的形態(tài)學變化；瓊脂糖凝膠電泳法觀察細胞凋亡的DNA片段化條帶。 結(jié)果：MTT法顯示24 h，48 h

3、，72 h實驗組HSC-T6細胞的增殖率均低于對照組，差異具有顯著性（t=6.07～46.98，10.98～63.97，20.76～107.68，均P<0.01）；HCPT對HSC-T6細胞和BRL-3A細胞的增殖抑制率均隨著藥物作用濃度的升高及藥物作用時間的延長而逐漸升高；當HCPT濃度>0.5 mg/L時，對BRL-3A細胞的毒性作用顯著性增高（均P<0.05）。0.25，0.5，1 mg/L的HCPT作用HSC-T6細胞24h，光

4、鏡下均可見細胞數(shù)量減少、體積縮小、核濃縮等變化，且隨著作用濃度的增加變化更加明顯。0.125，0.25，0.5 mg/L的HCPT作用HSC-T6細胞24h，流式細胞儀檢測顯示細胞凋亡率分別為：13.46％±2.42％，26.25％±5.65％，47.05％±8.76％，與對照組（4.89％±1.80％）相比，差異有顯著性（F=34.24，P<0.01）。0.5mg/L的HCPT作用HSC-T6細胞24h，透射電鏡下可見細胞體積縮小，核