Decoy核酸在LNCaP細胞中作用機制研究.pdf

1、Ⅱq大學m士學位論文Decoy核酸在LNCaP細胞中作用機制研究DecoynuclearacidtreatedinLNCaPcellsandpAktdownstream院系專業(yè)碩士研究生導師導師組成員導師組成員腫瘤醫(yī)院腫瘤學楊立峰葉定偉教授姚旭東副教授張世林副教授D“州棱礁在LNCaP細胞巾作用機制研究中史摘gDecoy核酸在LNCaP細胞中作用機制研究中文摘要目的前列腺癌在接受內分泌治療2年左右，約50％的忠者出現(xiàn)激素抵抗，進展為去勢

2、治療失敗前列腺癌(CRPC)。即使在CRPC狀態(tài)下，雄激素受體(AR)作為轉錄因子仍然持續(xù)激活下游基因的轉錄，產生PSA。通過雄激素受體反應元件陷阱核酸(AREdecoyDNA)在LNCaP細胞中作用，阻斷AR激活，研究其對下游信號通路的影響。方法根據根據tl前已知的位于PSA基因啟動子170附近的AREI序列(AGAACAgcaAGTGCT)和位于PSA基因啟動子一394附近的AREII序列(GGATcAgggAGTcTc)，人工合成

3、decoy核酸，并進行部分硫代和完全硫代修飾，同時敢側術端標記生物素或FITC。對照組核酸兩端分別標記生物素或FITC。應用凝膠電泳阻抑分析方法(EMSA)檢測4種人工合成的deeov核酸與LNCaP細胞核蛋白提取物特異性結合能力，模擬其與雄激素受體(ARl特異性結合情況。根據實驗結果選取與核蛋白特異性結合晟強的decoy核酸，通過脂質體Lipofectin””進行細胞轉染，轉染后通過MTS法檢測各組LNCaP細胞增殖能力；使用共聚焦顯

4、微鏡觀察轉染前后細胞的形態(tài)學改變：通過提取轉染后細胞內DNA行水平電泳檢查有無凋亡改變；通過westemblot檢測轉染后細胞內蛋白表達隋況及信號通路改變。結果l凝膠電泳阻抑分析方法(EMSA)：毗lnM，10nM，IOOnM分別作為探針濃度，通過EMSA檢測四種修飾過的decoy核酸，完全硫代的ARE1、ARE—IIdecoy核酸相對于部分硫代修飾的AREI、ARE—IIdecoy核酸以及對照核酸，與LNCaP細胞核蛋白特異性結臺能力