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1、研究目的:系統(tǒng)研究四君子湯的抗誘變作用及量效關(guān)系,探討四君子湯的抗誘變作用機(jī)理,確認(rèn)四君子湯對(duì)遺傳物質(zhì)的保護(hù)作用,為臨床上應(yīng)用四君子湯拮抗環(huán)磷酰胺等常用化療藥物的誘變性提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。 研究方法:采用小鼠骨髓嗜多染紅細(xì)胞微核試驗(yàn)、小鼠染色體畸變實(shí)驗(yàn)和人外周血淋巴細(xì)胞微核試驗(yàn)等3個(gè)測(cè)試系統(tǒng),以臨床常用的化療藥物環(huán)磷酰胺(CPP)、氟尿嘧啶(5-FU)和三氧化二砷(As<,2>O<,3>)為誘變劑(陽性對(duì)照物),研究四君子湯的抗誘變性
2、能。小鼠微核試驗(yàn)和染色體畸變實(shí)驗(yàn)各組動(dòng)物分別用生理鹽水或四君子湯連續(xù)灌胃7天后,腹腔注射誘變劑,處死前4小時(shí)各組動(dòng)物均腹腔注射秋水仙素液。微核標(biāo)本用直接涂片法制片,染色體標(biāo)本用滴片法制片。人外周血淋巴細(xì)胞微核試驗(yàn)在無菌操作培養(yǎng)人外周血24小時(shí)后,四君子湯各劑量組加入誘變劑以及不同劑量的四君子湯含藥血清,空白組加入等量無菌生理鹽水,陽性對(duì)照組加入相應(yīng)誘變劑及無菌生理鹽水,培養(yǎng)終止前4小時(shí)每個(gè)標(biāo)本均加入秋水仙素液。培養(yǎng)72小時(shí)后收獲細(xì)胞,采
3、用氣干法制片。所有玻片標(biāo)本經(jīng)Giemsa染色后,雙盲法閱片,在油鏡下觀察、計(jì)數(shù),并顯微照相記錄典型標(biāo)本。兩組間均數(shù)比較用t檢驗(yàn),各劑量組間用方差分析,同組的微核率與染色體畸變率進(jìn)行直線相關(guān)性分析。 研究結(jié)果: 1.小鼠骨髓細(xì)胞微核試驗(yàn):與空白組比較,三種陽性藥物組(CPP、5-FU、As<,2>O<,3>)小鼠的微核率明顯升高(p<0.01),說明這3種化療藥物對(duì)遺傳物質(zhì)均有明顯的誘變作用。在四君子湯拮抗CPP誘發(fā)微核實(shí)
4、驗(yàn)中:與陽性組比較,四君子湯中、高劑量組小鼠的微核率有極顯著差異(p<0.01);在四君子湯拮抗5-FU誘發(fā)微核實(shí)驗(yàn)中:與陽性組比較,四君子湯低、中劑量組小鼠的微核率有顯著性差異(p<0.05),四君子湯高劑量組有極顯著差異(p<0.01);在四君子湯拮抗As<,2>O<,3>誘發(fā)微核實(shí)驗(yàn)中:與陽性組比較,四君子湯低、高劑量組小鼠的微核率有顯著性差異(p<0.05),四君子湯中劑量組有極顯著差異(p<0.01)。經(jīng)方差分析,在四君子湯抗
5、CPP和5-FU誘變實(shí)驗(yàn)中,四君子湯低劑量與高劑量、中劑量與高劑量有顯著性差異(p<0.05),而低劑量與中劑量無顯著差異,未表現(xiàn)出明顯量效關(guān)系;在四君子湯抗As<,2>O<,3>誘變實(shí)驗(yàn)中,四君子湯低劑量與中劑量有顯著性差異(p<0.05),而低劑量與高劑量、中劑量與高劑量無顯著差異,未表現(xiàn)出明顯量效關(guān)系。 2.小鼠骨髓細(xì)胞染色體畸變實(shí)驗(yàn):與空白組比較,三種陽性藥物(CPP、5-FU、As<,2>O<,3>)小鼠染色體畸變率明
6、顯升高(p<0.01),說明這3種化療藥物對(duì)遺傳物質(zhì)均有明顯的誘變作用。在四君子湯拮抗CPP誘發(fā)染色體畸變實(shí)驗(yàn)中:與陽性組比較,四君子湯中、高劑量組染色體畸變率有顯著差異(p<0.05);在四君子湯拮抗5-FU誘發(fā)染色體畸變實(shí)驗(yàn)中:與陽性組比較,四君子湯低、中劑量組染色體畸變率有顯著性差異(p<0.05),四君子湯高劑量組有更顯著差異(p<0.01);在四君子湯拮抗As<,2>O<,3>誘發(fā)染色體畸變實(shí)驗(yàn)中:與陽性組比較,四君子湯低、高
7、劑量組染色體畸變率有顯著性差異(p<0.05),四君子湯中劑量組有極顯著差異(p<0.01)。經(jīng)方差分析,在四君子湯抗CPP、As<,2>O<,3>誘變實(shí)驗(yàn)中,四君子湯各劑量組間無顯著差異,未表現(xiàn)出量效關(guān)系;在四君子湯抗5-FU誘變實(shí)驗(yàn)中,四君子湯低劑量與高劑量、中劑量與高劑量有顯著性差異(p<0.05),而低劑量與中劑量無顯著差異,無明顯量效關(guān)系。經(jīng)直線相關(guān)分析,小鼠微核率與染色體畸變率存在顯著正相關(guān)關(guān)系(r=0.9209,p<0.0
8、1),說明微核的形成與染色體畸變、損傷有密切關(guān)系。 3.人體外周血淋巴細(xì)胞微核試驗(yàn):與空白組比較,三種陽性藥物組(CPP、5-FU、As<,2>O<,3>)的微核率明顯升高(p<0.01),說明這3種化療藥物對(duì)遺傳物質(zhì)均有明顯的誘變作用。在四君子湯拮抗CPP誘發(fā)微核實(shí)驗(yàn)中:與陽性組比較,四君子湯中劑量組的微核率有顯著差異(p<0.05),而四君子湯高劑量組有更顯著差異(p<0.01);在四君子湯拮抗5-FU、As<,2>O<,3
9、>誘發(fā)微核實(shí)驗(yàn)中:與陽性組比較,四君子湯低劑量組的微核率有顯著性差異(p<0.05),中、高劑量組有更顯著差異(p<0.01)。經(jīng)方差分析,在四君子湯抗CPP誘變實(shí)驗(yàn)中,四君子湯低劑量與高劑量、低劑量與中劑量間有顯著性差異(p<0.05),中劑量與高劑量間無顯著差異,無明顯量效關(guān)系;在四君子湯抗5-FU誘變實(shí)驗(yàn)中,四君子湯低劑量與高劑量、低劑量與中劑量、中劑量與高劑量比較,有顯著性差異(p<0.05),在統(tǒng)計(jì)學(xué)上表現(xiàn)出量效關(guān)系;在四君子
10、湯抗As<,2>O<,3>誘變實(shí)驗(yàn)中,四君子湯低劑量與中劑量有顯著性差異(p<0.05),低劑量與高劑量、中劑量與高劑量間無顯著差異,無明顯量效關(guān)系。 研究結(jié)論: 1.四君子湯具有顯著拮抗環(huán)磷酰胺等三種常用化療藥物誘變性的作用,但未表現(xiàn)出明顯的量效關(guān)系; 2.四君子湯抗環(huán)磷酰胺等化療藥物誘變作用的可能機(jī)理是增強(qiáng)細(xì)胞在染色體水平上對(duì)遺傳物質(zhì)的保護(hù)作用以及提高細(xì)胞對(duì)染色體損傷的修復(fù)能力; 3.四君子湯對(duì)人與小
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