柴胡疏肝散、四君子湯、柴疏四君子湯作用于肝郁證模型的生物學基礎.pdf

1、“方證相關”是中醫(yī)辨證論治和方劑學中的重要邏輯命題。方劑的功效不僅與方藥配伍有關，而且還與其作用的對象有關，方劑功效與其所作用的證之間具有一定的適配性，即方劑效用優(yōu)劣在相當程度上取決于所作用對象的病機與其方藥配伍關系之間的針對性。方與證之間存在有關聯(lián)程度大小的問題?！胺阶C相關”目前正引起學術界高度重視，諸多學者在實驗、理論、教學、臨床中進行了大量的研究、論證、貫徹與應用，但是直到目前，還沒有人能真正從實證意義上為其提供系統(tǒng)而全面的客觀證

2、據(jù)。 論文分為兩部分，文獻綜述部分主要對柴胡疏肝散臨床與實驗研究進行了總結，對肝郁證的研究進展進行了綜述。實驗研究部分在整體水平上對肝郁模型的現(xiàn)代生物學機制作了較為系統(tǒng)的探察，并在此基礎上，對疏肝健脾類方對該模型的不同影響進行了探討。 實驗研究主要分三步進行。實驗一為肝郁模型的復制，大鼠連續(xù)造模三周，自然恢復一周，連續(xù)觀察第一、二、三、四周大鼠指標變化情況，以了解成模的具體時間和生物學特點；實驗二即在肝郁大鼠模型建立的基

3、礎上，選取柴胡疏肝散、四君子湯、柴疏四君子湯，從神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡的角度，探察三方作用于肝郁證模型呈現(xiàn)出的不同藥理作用譜，通過比較分析，發(fā)現(xiàn)其同異規(guī)律和方證關聯(lián)性大?。粚嶒炄秊檫M一步觀察柴胡疏肝散對肝郁大鼠模型甲狀腺軸和循環(huán)系統(tǒng)的部分作用，以探察柴胡胡疏肝散對肝郁證的廣泛效用。 實驗一肝郁大鼠模型的建立 方法：將大鼠隨機分為正常組、模型組2組，每組40只。用模具束縛的方法造模21天，自然恢復7天，以周為單位觀察不同時

4、間點大鼠外觀行為的變化；用高效液相電化學法測定正常組與模型組大鼠海馬單胺神經(jīng)遞質(zhì)(5-HT、5-HIAA、NE、HVA)的含量；放免法測定下丘腦CRH，垂體ACTH，血清CORT、GAS、IL-1、IL-2、IL-6、TNF，血漿MTL、SS；稱量大鼠體重及免疫器官脾、胸腺的重量。 結果：與正常組比較，模型組在造模期間，海馬5-HT、5-HIAA均升高，第三周差異顯著(P＜0.001，P＜0.05)；海馬NE、HVA降低，第三周

5、差異顯著(P＜0.01，P＜0.05)；下丘腦CRH、垂體ACTH、血清CORT升高，第三周均出現(xiàn)顯著差異(P＜0.05)；血清GAS、血漿MTL含量升高，第三周有顯著差異(P＜0.05)；血漿SS第一周、二顯著降低(P＜0.01)，第三周有所恢復；脾指數(shù)和胸腺指數(shù)三周均降低并有顯著性差異(P＜0.01)；血清免疫因子(IL-1、IL-2、IL-6、TNF)第二、三周下降，第三周差異顯著(P＜0.01或P＜0.05)。 模型組大

6、鼠自然恢復一周后，海馬5-HT明顯降低，差異有顯著意義(P＜0.001)；5-HIAA降復至正常水平；NE、HVA升高接近正常組；下丘腦CRH含量仍升高且差異顯著(P＜0.001)；垂體ACTH和血清CORT含量下降，但未至正常水平；血清GAS恢復到正常水平；血漿MTL仍升高且差異顯著(P＜0.01)；血漿SS升高，差異顯著(P＜0.01)；脾、胸腺重量和血清免疫細胞因子升復至正常。 實驗二柴胡疏肝散及其相關方對肝郁證模型大鼠作

7、用的比較 方法：實驗動物隨機分為2組：正常組20只和模型50只。模型組動物按前述束縛方法制模三周，正常對照組不做處理，自然飼養(yǎng)。第三周結束時隨機從正常組和模型組中取大鼠10只，斷頭處死取材。模型組再次隨機分成模型對照、柴胡疏肝散、四君子湯、柴疏四君子湯共四組。中藥三個組動物分別按1ml/100g給予相應藥液灌胃，每日一次，連續(xù)7天。模型組和正常組分別給予等量生理鹽水灌胃。各組大鼠于第7天灌胃后2小時處殺取材，指標測定同上。

8、 結果：與正常組比較，造模三周結束時模型組海馬5-HT和5-HIAA顯著升高(P＜0.01，P＜0.05)，NE、HVA顯著降低(P＜0.05)；血漿ACTH和血清CORT顯著升高(P＜0.01，P＜0.05)；血漿MTL和血清GAS顯著降低(P＜0.05，P＜0.01)；血清免疫細胞因子(IL-1、IL-2、IL-6、TNF)均顯著降低(P＜0.05，P＜0.01，P＜0.05，P＜0.05)。 模型大鼠自然恢復一周后海馬5

9、-HT顯著降低(P＜0.01)；5-HIAA降低，NE升高分別接近正常水平，HVA上升但仍低于正常組(P＞0.05)；血漿ACTH和垂體ACTH的含量仍顯著高于正常組(P＜0.01)；血清CORT降低，與正常組無差異；血清GAS、血漿MTL一周后升復接近正常；血清IL-1、IL-6、TNF均升高接近正常組；血清IL-2仍顯著低于正常組(P＜0.01)。 與模型組比較，經(jīng)藥治療一周后，三方組大鼠海馬5-HT均顯著升高(P＜0.05

10、)，5-HIAA和NE及HVA無顯著變化；柴疏組和柴四組大鼠垂體ACTH顯著降低(P＜0.001)，四君子湯組大鼠垂體ACTH無顯著變化；柴疏組和柴四組大鼠血漿ACTH顯著降低，四君子湯組血漿ACTH顯著升高(P＜0.05)；三方組大鼠血清CORT均降，其中柴疏組降低有顯著意義(P＜0.01)；柴四組大鼠血清GAS顯著降低(P＜0.05)，其余兩組無顯著差異；三方組大鼠血漿MTL均無顯著變化；三方組大鼠血清IL-2、血清IL-6、TNF

11、均見不同程度升高，其中柴疏組大鼠血清IL-2升高顯著(P＜0.05)；柴疏組和柴四組大鼠血清IL-1含量升高，但無顯著差異(P＞0.05)。 與正常組比較，三方組大鼠海馬5-HT和5-HIAA降低，海馬NE升高，但均無顯著差異(P＞0.05)；柴疏組大鼠海馬HVA升高，柴疏組和柴四組大鼠海馬HVA降低，差異均有顯著意義(P＜0.05)；柴疏組大鼠垂體ACTH和血清CORT顯著降低(P＜0.05)，柴四組和四君子湯組大鼠垂體ACT

12、H和血清CORT降低，但無顯著差異(P＞0.05)；三方組大鼠血漿ACTH均仍升高，差異顯著(P＜0.01，P＜0.001，P＜0.05)；三方組大鼠血清GAS和血漿MTL均升高，但無顯著差異(P＞0.05)；三方組大鼠血清IL-2均顯著升高(P＜0.05)；三方組大鼠血清IL-1和IL-6呈不同程度升高，其中柴疏組大鼠血清IL-1和IL-6升高顯著(P＜0.05)；四君子湯組大鼠血清TNF顯著升高(P＜0.05)。 實驗三肝郁

13、大鼠模型血液流變和甲狀腺功能的變化及柴胡疏肝散的作用 方法：實驗動物隨機分為2組即：正常組20只，模型組30只。模型組動物按前述束縛方法制模三周，正常對照組不做處理，自然飼養(yǎng)。第三周結束時隨機從正常對照組和模型組中取大鼠10只，處死取材。模型組再次隨機分成模型對照、柴胡疏肝散組，每組10只。中藥組以1ml/100g給予柴胡疏肝散藥液灌胃，每日一次，連續(xù)7天。模型組和正常組分別給予等量生理鹽水灌胃。各組大鼠于第7天灌胃后2小時處殺

14、取材，用血液流變測試儀測定各組大鼠高、中、低切變率下的全血黏度、全血還原黏度及紅細胞壓積、變形指數(shù)、聚集指數(shù)；放免法測定血漿TSH、TXB2、6-keto-PGF1α及血清T3、T4的含量。 結果：與正常組比較，造模三周后模型組血漿TSH、血清T3、T4均顯著降低(P＜0.001，P＜0.01，P＜0.01)；150、38、10、5四個切變率下的全血黏度和還原黏度均顯著升高(P＜0.001或P＜0.01)；紅細胞壓積顯著升高(P

15、＜0.01)；變形指數(shù)、聚集指數(shù)顯著降低(P＜0.05)；血漿6-keto-PGF1α顯著降低(P＜0.01)，血漿TXB2顯著升高(P＜0.05)。自然恢復一周后的模型組大鼠血漿TSH、血清T3、T4均明顯回升至正常；四個切變率下的全血黏度和還原黏度降復至正常，紅細胞壓積、變形指數(shù)、聚集指數(shù)、血漿6-keto-PGF1α和TXB2均恢復正常。與模型組比較，柴胡疏肝散組大鼠治150切變率的全血還原黏度仍顯著高于正常組(P＜0.01)，血

16、漿TXB2顯著降低(P＜0.05)，其余指標變化不顯著。 綜合結果表明，模具束縛三周所致的肝郁證大鼠模型以海馬單胺神經(jīng)遞質(zhì)失調(diào)和HPA軸亢進為中心，同時伴有免疫系統(tǒng)、胃腸功能及甲狀腺軸受抑，血液呈高粘狀態(tài)的一種涉及多系統(tǒng)異常的整體功能態(tài)。停止造模一周，模型大鼠上述多系統(tǒng)多數(shù)指標可恢復至正常，其中海馬5-HT仍顯著降低，垂體和血漿ACTH仍顯著升高，血清IL-2仍顯著降低。柴胡疏肝散、四君子湯、柴疏四君子湯三方對肝郁證模型均有不同

17、程度的調(diào)治作用，但綜合其影響指標，其中以柴胡疏肝散的效用較優(yōu)。三方在作用強度和作用環(huán)節(jié)上有所不同，三方均對海馬5-HT、HPA軸和免疫因子有一定影響，但柴疏組和柴四組對HPA軸作用明顯，柴疏組和柴四組還分別對免疫因子和胃腸激素作用明顯。結論：神經(jīng)-內(nèi)分泌-免疫網(wǎng)絡調(diào)控異常是該肝郁證模型的生物學基礎；柴胡疏肝散對該模型具有良好的整體調(diào)節(jié)作用，證明該方與肝郁證有更高的關聯(lián)性；中醫(yī)疏肝、疏肝健脾及健脾方作用于同一肝郁證，其作用在一定范圍內(nèi)具有