非索非那定體內(nèi)探針法考察多劑量黃芪顆粒對人體P-gp活性影響的隨機(jī)、安慰劑對照研究.pdf

1、目的：
　　 1.探討黃芪顆粒對人體P—gp活性的影響，以預(yù)期黃芪顆粒與常見合并用藥相互作用的臨床可能性；
　　 2.考察在中國人中MDR1 C3435T和SLC0181 T521C基因多態(tài)性對非索非那定(FEX)藥動學(xué)的影響：
　　 3.考察黃芪顆粒對MDR1 C3435T和SLCO1B1 T521C不同基因亞組的影響。
　　 方法：
　　 1.首先建立FEX血漿濃度的測定方法。以乙腈直接沉淀法

2、處理200μl血漿樣品，高速離心后上清液吹干，復(fù)溶后直接進(jìn)樣分析。分析柱：Waters Symmetry C18色譜柱(4.6mm×250mm，5μm)；流動相：0.1mol·L—1醋酸銨溶液—乙腈(63：37，v/v)；流速：1mL·min—1；檢測器：熒光檢測器(激發(fā)波長230nm，發(fā)射波長290nm)；以苯海拉明為內(nèi)標(biāo)，用內(nèi)標(biāo)法定量，進(jìn)行色譜確證試驗。
　　 2.設(shè)計一項隨機(jī)、雙周期、安慰劑對照臨床試驗，以FEX藥動學(xué)參數(shù)

3、作為人體內(nèi)P—gp活性的探針。14名健康男性志愿者隨機(jī)口服黃芪顆粒(4g bid)或安慰劑(4g bid)，多劑量連續(xù)服用一周后，服用探針?biāo)幬颋EX片120mg，采集不同時間點(diǎn)的血漿，經(jīng)色譜測定和DAS2.1.1統(tǒng)計軟件分析，選擇非房室模型計算藥動學(xué)參數(shù)，并進(jìn)行生物等效性統(tǒng)計分析。比較安慰劑組與黃芪組中FEX的藥動學(xué)差異。
　　 3.利用黃芪顆?！狥EX相互作用研究中志愿者全血樣本，檢測MDR1 C3435T和SLCO1B1 T

4、521C兩個位點(diǎn)的突變情況，對不同基因型亞組中的FEX藥動學(xué)參數(shù)進(jìn)行數(shù)據(jù)挖掘。
　　 結(jié)果：
　　 1.本研究建立的色譜方法專屬性強(qiáng)。在20—1000μg/L濃度范圍內(nèi)線性良好(r=0.9993，n=5)。定量限為20μg/L。高、中、低質(zhì)控樣品的日內(nèi)、日間RSD均小于10％，方法學(xué)回收率為105.9％，提取回收率為94.6％。
　　 2.在安慰劑組中，F(xiàn)EX的藥動學(xué)參數(shù)：T1/23.75±1.47h；Cmax7

5、45.11±137.41μg/L；Tmax2.25±0.47 h；AUC(0—t)3894.27±923.45μg/L*h；AUC(0—∞)3993.84±912.97μg/L*h。在黃芪顆粒組中，F(xiàn)EX的藥動學(xué)參數(shù)：T1/24.00±1.24 h；Cmax709.4±170.03μg/L；Tmax2.21±0.51 h；AUC(0—t)3832.72±1077.60μg/L*h；AUC(0—∞)3983.53±1019.83μg/L*

6、h。黃芪顆粒對FEX的藥動學(xué)影響無統(tǒng)計學(xué)意義(P＞0.05)。FEX片在服用安慰劑組和服用黃芪顆粒組中人體內(nèi)生物等效。與國外文獻(xiàn)報道相比較，發(fā)現(xiàn)Cmax、Tmax和AUC0～t的差異無統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05)，T1/2與國內(nèi)文獻(xiàn)報道值(5.34±1.15h)較為接近，但小于國外文獻(xiàn)報道的9.6±2.9h。
　　 3.14名健康志愿者中MDR1 C3435T基因型的分型結(jié)果：野生型純合子CC(n=5)；突變型純合子TT(n=3)

7、、突變型雜合子CT(n=6)。OATP1B1 T521C基因型分型結(jié)果：TT(n=12)；TC(n=2)。
　　 4.MDR1 C3435T基因型與非索非那定藥動學(xué)關(guān)系：突變基因T攜帶者中，F(xiàn)EX的T1/2要高于野生型CC基因型攜帶者中的數(shù)據(jù)(TT、CT、TT+CT＞CC，P＜0.01)。在黃芪組中，未觀察到T1/2的基因劑量效應(yīng)(TT、CT、TT+CT＞CC→TT、CT、TT+CT=CC，P＞0.05)。通過比較安慰劑組和黃芪

8、組中相應(yīng)CC基因型的藥動學(xué)參數(shù)，發(fā)現(xiàn)T1/2的差異具有統(tǒng)計學(xué)意義(P＜0.05，T1/2安慰劑＜T1/2黃芪組)。
　　 5.FEX在安慰劑組中的PK參數(shù)并沒有呈現(xiàn)OATP1B1 T521C的基因劑量效應(yīng)。黃芪顆粒預(yù)處理后，與OATP1B1521TT野生型純合子相比，突變型雜合體(CT)攜帶者中的Cmax有升高跡象(889.50±11.54 vs679.43±158.09μg/L，P=0.05)。
　　 結(jié)論：
　

9、　 1.本實(shí)驗建立的RP—HPLC法快速簡便、靈敏、專屬、準(zhǔn)確，可用于FEX的臨床藥動學(xué)研究；
　　 2.黃芪顆粒預(yù)處理一周不會顯著影響人體P—gp活性，但它的影響具有MDR1C3435T基因型依賴性。在MDR1 C3435T基因型分亞組的情況下，顯示了黃芪顆粒對P—gp的影響。黃芪顆粒對野生型等位基因個體中的P—gp有一定的抑制作用。野生型個體中的P—gp受到的抑制作用程度要大于突變型個體中P—gp受到的抑制作用程度。