揉髕手法對兔膝關節(jié)軟骨細胞凋亡基因表達影響的實驗研究.pdf

1、目的：通過手術方法建立新西蘭兔右膝關節(jié)骨內高壓型骨性關節(jié)炎，分組進行手法治療或玻璃酸鈉關節(jié)內注射等干預模型，造模后8周末處死所有動物，取右膝關節(jié)內側脛骨平臺軟骨組織，采用HE染色光鏡下檢測軟骨組織的變化，原位末端標記法檢測膝關節(jié)軟骨細胞的凋亡率，采用免疫組化法檢測軟骨細胞增殖率,檢測數據通過統(tǒng)計學處理以探討：(1)揉髕手法對兔膝關節(jié)軟骨細胞凋亡的影響。(2)揉髕手法對兔膝關節(jié)軟骨細胞凋亡相關基因表達的影響，及手法治療的可能作用機制。(3

2、)揉髕手法治療緩解兔膝關節(jié)軟骨組織退行性改變的作用機理，發(fā)掘中醫(yī)―治未病的價值和優(yōu)勢。
　　方法：隨機將50只新西蘭兔分為手法組、藥物組、模型組、假模組和正常組，每組10只;前3組手術結扎相關的血管造成骨內高壓型骨性關節(jié)炎動物模型，假模組手術但不損傷相應血管，正常組不做任何處理。手法組每只兔揉髕手法治療17次，藥物組膝關節(jié)內注射玻璃酸鈉注射液5次，其他兔無特殊處理。造模后8周末處理所有動物，取右膝內側脛骨平臺軟骨組織，采用HE染色

3、光鏡下檢測軟骨組織的變化，原位末端標記法檢測軟骨細胞凋亡率，免疫組化法檢測軟骨細胞凋亡基因Bcl－2、Bax、Fas表達率，數據經統(tǒng)計學處理。
　　結果：軟骨組織病理學變化，肉眼觀察可見：假模組和正常組：關節(jié)軟骨表面光滑完整,呈乳白色或淡藍色，半透明狀；模型組：關節(jié)軟骨面可見蟲蝕樣斑點,表面粗糙,不光潔,軟骨透明度降低；手法組和藥物組：關節(jié)軟骨面光滑,呈乳白色、色澤黯淡。HE組織染色后觀察到手法組：軟骨表面光滑平整，四層結構基本清

4、晰。軟骨層增厚，表、中層細胞增多，排列稍紊亂，并出現簇狀增生細胞團。潮線完整清晰。藥物組：大部分軟骨表面光滑平整，局部可見小裂隙，四層結構基本清晰。軟骨層增厚，表、中層細胞增多，排列稍紊亂，并出現簇狀增生細胞團。潮線尚存，但部分稍模糊或出現雙潮線。模型組：軟骨表面局部凹凸不平，缺損及裂隙易見，四層正常結構消失。軟骨層明顯變薄，軟骨細胞減少，大小不等，簇集現象明顯，排列紊亂，并可見灶性崩解、壞死，嗜酸性小體多見。潮線多數消失。假模組：軟骨

5、表面不光滑，可見缺損及骨贅形成。四層結構紊亂。軟骨細胞部分呈灶性崩解、壞死，嗜酸性小體散在分布。部分軟骨層增厚，表、中層細胞增多，排列紊亂，有簇狀增生。潮線大部分不完整或出現雙潮線。空白組：軟骨表面光滑平整，表層、中間層、柱狀細胞層及鈣化層四層結構清晰。細胞大小一致，排列規(guī)整。潮線完整清晰。相關基因表達手法組Bcl－2表達(34.20±12.99)％，模型組(19.00±5.34)%(兩組比較P＜0.05差異有統(tǒng)計學意義);手法組Bax