HLA-Cw-0602轉(zhuǎn)基因純合子小鼠的篩選及基因遺傳狀況研究.pdf

1、[目的]
　　 通過FVB HLA-Cw*0602轉(zhuǎn)基因小鼠的繁育及純合子小鼠的篩選，并用β型溶血性鏈球菌經(jīng)不同途徑感染HLA-Cw*0602轉(zhuǎn)基因小鼠，研究微生物因素對轉(zhuǎn)基因小鼠的銀屑病誘導(dǎo)效應(yīng)，以期獲得具有人類銀屑病樣病理變化特征并能穩(wěn)定遺傳的轉(zhuǎn)基因小鼠模型，為銀屑病發(fā)病機理的探索提供研究基礎(chǔ)，為銀屑病治療藥物的開發(fā)研究提供有效的試驗動物模型。
　　 [方法]
　　 選用前階段試驗獲得的FVB HLA-Cw*

2、0602轉(zhuǎn)基因原代小鼠F01、F03和F06號與同品系FVB非轉(zhuǎn)基因小鼠進行交配傳代，自F2代起采用全同胞交配繁育至F3代。小鼠出生后12天從鼠趾中提取基因組DNA，用PCR法篩選陽性轉(zhuǎn)基因小鼠，并根據(jù)F3代中每窩轉(zhuǎn)基因小鼠的出現(xiàn)率篩選出假定純合子小鼠。將假定的純合子小鼠與同品系非轉(zhuǎn)基因小鼠，最后根據(jù)其子代的基因整合率篩選出純合子小鼠。
　　 通過PCR方法擴增陽性轉(zhuǎn)基因小鼠鼠趾基因組中的HLA-Cw*0602基因片段，PCR產(chǎn)

3、物純化回收后與pMD19-T Vector載體連接，將連接產(chǎn)物轉(zhuǎn)化測序，鑒定其基因序列。
　　 分別對6周齡FVB HLA-Cw*0602小鼠經(jīng)腹腔注射絲裂霉素0.2mg/只，降低其免疫力，然后分別以皮膚創(chuàng)面感染、腹腔注射和皮內(nèi)注射的方式給予β型溶血性鏈球菌，進行試驗觀察和微生物學(xué)檢查。
　　 [結(jié)果]
　　 轉(zhuǎn)入基因HLA-Cw*0602能在FVB小鼠體內(nèi)遺傳，且四代以內(nèi)轉(zhuǎn)基因小鼠表型基本無異常，也未見近交衰退

4、現(xiàn)象。從F06號系的F2代中篩選出1只雄性擬定純合子小鼠，經(jīng)與相同品系的非轉(zhuǎn)基因雌鼠交配后所產(chǎn)兩窩共20只小鼠，PCR檢測均呈陽性，證實為一純合子小鼠。
　　 經(jīng)載體回收和轉(zhuǎn)化后測序鑒定表明，PCR產(chǎn)物基因序列和HLA-Cw*0602片段基因序列相似性為98％。
　　 6組FVB HLA-Cw*0602轉(zhuǎn)基因小鼠經(jīng)兩種濃度三種途徑感染β型溶血性鏈球菌均能引起小鼠死亡，從病死鼠的心臟穿刺液中均分離到β型溶血性鏈球菌。全部F

5、VB HLA-Cw*0602轉(zhuǎn)基因小鼠均未出現(xiàn)自發(fā)性銀屑病樣皮膚病。
　　 [結(jié)論]
　　 轉(zhuǎn)入基因HLA-Cw*0602能在FVB小鼠體內(nèi)遺傳并存在突變現(xiàn)象，轉(zhuǎn)入基因的遺傳特征符合常染色體單位點整合。三個世代內(nèi)便可篩選出純合子小鼠，為后續(xù)研究奠定了基礎(chǔ)。
　　 FVB HLA-Cw*0602轉(zhuǎn)基因小鼠經(jīng)三種途徑感染兩種濃度的β型溶血性鏈球菌后未能自發(fā)性出現(xiàn)銀屑病樣皮膚病，說明在一定濃度下的β型溶血性鏈球菌感染與