白靈菇多糖高產(chǎn)菌株的誘變選育.pdf

1、本文采用紫外、激光誘變與原生質(zhì)體育種技術(shù)相結(jié)合，選育出白靈菇速生高產(chǎn)多糖的、適宜液體發(fā)酵生產(chǎn)的新菌株。主要研究結(jié)果如下： 1.性能良好的出發(fā)菌株是獲得高產(chǎn)量代謝產(chǎn)物的基礎(chǔ)，因此本論文收集了不同產(chǎn)地和類型的5株菌株(JZ、JT、PZ、FB、PJ)做為出發(fā)菌株，以固體培養(yǎng)基上的生長速度和菌落形態(tài)，液體培養(yǎng)的生物量和多糖產(chǎn)量為指標，進行了篩選比較，確定以JZ作為出發(fā)菌株。 2.本實驗采用酶解白靈菇菌絲體得到的原生質(zhì)體作為誘變材

2、料。詳細研究了各因素對白靈菇原生質(zhì)體制備和再生的影響作用。通過單因素和正交實驗確定最適條件為：采用8日齡菌絲，以0.6M甘露醇作為滲透壓穩(wěn)定劑，PH5.8時，在1.5％溶壁酶+0.2％蝸牛酶+0.3％纖維素酶的作用下，32℃水浴酶解2.5小時，可得到1.7×107/mL原生質(zhì)體，再用雙層混合再生培養(yǎng)基培養(yǎng)，可達到1.38％的再生率。 3.通過紫外線，He-Ne激光單一和復(fù)合方法對白靈菇JZ的原生質(zhì)體進行反復(fù)誘變；確定了誘變最適作

3、用劑量，即當致死率達75％時，分別為：UV30s和He-Ne激光10min。其中激光和紫外線-激光復(fù)合誘變的效果較好，得到的突變株正突變率較高。最終從近200株誘變菌株中篩選出10株突變株，它們在固體培養(yǎng)基上生長情況及菌落形態(tài)良好；液體發(fā)酵多糖產(chǎn)量及生物量也有不同程度提高.其中HN4的多糖產(chǎn)量最高，是出發(fā)菌株的116.76％；且經(jīng)10代傳代后該菌株遺傳特性穩(wěn)定。 4.在突變株的鑒定中發(fā)現(xiàn)：除了菌株FH14外的突變株均與出發(fā)菌株J

4、Z有拮抗現(xiàn)象。酯酶同工酶同工酶分析發(fā)現(xiàn)，10株突變株的酶譜都體現(xiàn)出了一定的差異性，突變株的平均變異系數(shù)為0.831，從蛋白表達水平上說明菌株發(fā)生了變異。同時突變株和出發(fā)菌株間也表現(xiàn)出了的共性，從位置上看，Rf=0.10，Rf=0.91Rf=0.35酶帶為所有菌株共有，說明這些菌株有共同的遺傳基礎(chǔ)，即可認為這三條酶帶是北京掌型白靈菇的特征性酶帶。用NTSYS-pc2.10軟件對酶譜進行相似性模糊聚類分析，得到菌株間的親緣關(guān)系樹狀圖。出菇實