細胞緊密連接蛋白基因claudin-11在膀胱癌組織中的表達變化及機制研究.pdf

1、研究背景
　　 膀胱癌是常見的泌尿生殖系腫瘤，目前對于膀胱痛患者的診斷主要依據(jù)膀胱鏡檢和組織病理活檢，但是目前的病理學診斷存在缺陷，如對于原位癌的診斷，有可能導致對膀胱癌診斷的局限性，此外對膀胱癌的分級診斷方面，病理診斷也缺乏精確性，，因此延誤患者的治療時機，影響患者的預后及生活質(zhì)量。因此，尋找一種無創(chuàng)的，敏感性高的方法對膀胱癌進行早期診斷及判斷預后有著深遠的意義。claudins蛋白是上皮細胞不可或缺的膜內(nèi)在緊密連接蛋白，cl

2、audins的異常表達可引起上皮組織中緊密連接完整性的破壞，導致細胞間黏附減弱，細胞生長所需的營養(yǎng)因子及其他因子擴散，從而引起細胞極性丟失、生長失控，最終導致腫瘤的發(fā)生及擴散轉移。
　　 研究目的
　　 研究細胞緊密連接蛋白基因claudin-11在膀胱癌組織和癌旁組織的表達變化，并探討其在膀胱癌發(fā)生發(fā)展中的機制。
　　 研究方法
　　 采用實時定量逆轉錄-聚合酶鏈反應(Real-timePCR)檢測cl

3、audin家族在32對膀胱尿路上皮癌組織及其配對的癌旁組織中的表達水平。對claudin-11啟動子區(qū)域的CpG島序列進行重亞硫酸鹽處理，然后針對處理過的序列設計三個甲基化的目的基因片段，選取10例全膀胱手術患者癌及癌旁標本用亞硫酸氫鹽測序法(BPS)法檢測claudin-11在膀胱癌組織中的甲基化表達情況。用5-Aza-dc對膀胱癌細胞株進行去甲基化處理，同時設計空白對照組，觀察細胞株隨著時間的推移，其去甲基化程度的變化。最后討論cl

4、audin-11基因在膀胱癌組織中的表達變化以及claudin-11啟動子區(qū)域CpG島甲基與膀胱癌發(fā)生發(fā)展的相關性。
　　 結果
　　 對細胞緊密連接蛋白claudins基因在膀胱癌組織中的篩選結果顯示claudin-1，4，7在膀胱癌組織中呈現(xiàn)高表達，claudin-11在膀胱癌中呈現(xiàn)低表達，比較claudin-11在非肌層浸潤性膀胱癌和肌層浸潤性膀胱癌中癌及癌旁的表達情況，發(fā)現(xiàn)claudin-11在非肌層浸潤性膀胱癌

5、和肌層浸潤性膀胱癌中的表達無明顯差異。以claudin-11作進一步研究，BPS法檢測結果顯示在所設計的claudin-11啟動子區(qū)域CpG島甲基化的三個目的片段中，第一個片段(93.1％vs82.3％，P<0.001)與第三個片段(25.5％vs18.7％，P<0.001)中claudin-11在膀胱癌中的甲基化程度比癌旁高，第二個目的片段(11.5％vs13.9％P>0.05)中claudin-11在膀胱癌與癌旁中的甲基化程度統(tǒng)計學

6、沒有顯著差異。去甲基化后的膀胱癌細胞株5637隨著時間的推移，claudin-11的表達越來越高。
　　 結論
　　 進一步驗證了claudin-1，4，7在膀胱癌組織中的表達情況，提示了claudin-11基因的失活與膀胱癌的發(fā)生相關，但是與膀胱癌的分級分期無明顯相關。Claudin-11啟動子區(qū)域內(nèi)CpG島的甲基化可能是導致其在膀胱癌組織中失活的主要因素，并且claudin-11在膀胱癌中的失活可以增加膀胱癌細胞的侵