牛卵母細(xì)胞及胚胎的玻璃化冷凍研究.pdf

1、本實驗對牛卵母細(xì)胞在成熟培養(yǎng)時間、玻璃化液處理時間、玻璃化載體、所帶顆粒細(xì)胞層數(shù)、玻璃化液及濃度5個方面進(jìn)行了比較選擇，優(yōu)化了牛卵母細(xì)胞的玻璃化冷凍保存方法。本實驗還對牛胚胎在發(fā)育階段、玻璃化冷凍載體的玻璃化冷凍效果進(jìn)行了研究。(1)體外成熟培養(yǎng)22h后的牛母細(xì)胞冷凍效果較好，其冷凍解凍體外受精后的卵裂率和囊胚率分別為41.80％和15.23％，與成熟培養(yǎng)12h后的卵母細(xì)胞差異顯著(p＜0.05)，與成熟16h、24h的卵母細(xì)胞差異不顯

2、著(p＞0.05)。(2)卵母細(xì)胞在冷凍保護(hù)液中處理30S的玻璃化冷凍效果較好，其冷凍解凍體外受精后的卵裂率及囊胚率分別為41.18％和14.70％，囊胚率方面：30S組與15S、60S組差異極顯著(p＜0.01)；與45S組差異顯著(p＜0.05)。(3)不同載體的對比：對玻璃OPS管、塑料OPS管和0.25ml細(xì)管作為卵母細(xì)胞的載體進(jìn)行玻璃化冷凍效果比較后發(fā)現(xiàn)：玻璃OPS管和塑料OPS管冷凍效果較好。三種載體的卵母細(xì)胞解凍后無論體外

3、受精的卵裂率還是囊胚率均無顯著差異(p＞0.05)。0.25ml細(xì)管玻璃化冷凍效果稍低于OPS玻璃化冷凍法，但差異不顯著(p＞0.05)(4)保留2～3層顆粒細(xì)胞的卵母細(xì)胞玻璃化冷凍的冷凍效果較好，其冷凍解凍體外受精后的卵裂率和囊胚率分別為40.13％和15.13％。囊胚率方面：2～3層顆粒細(xì)胞組與不含顆粒細(xì)胞組差異顯著(p＜0.05)，2～3層顆粒細(xì)胞組與完整顆粒層組差異均不顯著(p＞0.05)。完整顆粒層卵母細(xì)胞的卵裂率與不含顆粒層

4、卵母細(xì)胞的卵裂率21.21％差異顯著(p＜0.05)，含2～3層顆粒細(xì)胞的卵母細(xì)胞的卵裂率與不含顆粒層的卵母細(xì)胞差異極顯著(p＜0.01)。(5)通過兩種冷凍保護(hù)劑及不同配比濃度玻璃化冷凍牛卵母細(xì)胞解凍后體外受精的卵裂率，體外培養(yǎng)的囊胚率的對比得出EDFS30這種組合及配比濃度的牛卵母細(xì)胞玻璃化冷凍效果較好。(6)不同發(fā)育時期的牛體外培養(yǎng)胚胎玻璃化冷凍效果得出冷凍牛囊胚效果比冷凍牛桑椹胚效果好。牛囊胚玻璃化冷凍解凍后形態(tài)正常率為85.7