豬MII期卵母細胞玻璃化冷凍的研究.pdf

1、為了探索建立有效、價廉而易操作的豬卵母細胞玻璃化冷凍方案，本研究以豬體外成熟MII期卵母細胞為試驗材料，著重從冷凍保護劑、冷凍載體、玻璃化冷凍前預(yù)處理（化學(xué)去脂）等環(huán)節(jié)出發(fā)，開展了如下四個方面的試驗。
　　 (1)試驗一研究了化學(xué)去脂(chemicaldelipation)對豬MII期卵母細胞玻璃化冷凍的影響。結(jié)果顯示：①存活率：化學(xué)去脂組和直接冷凍組、離心冷凍組差異不顯著(P＞0.05)②卵裂率：化學(xué)去脂組和直接冷凍組、離心冷

2、凍組差異顯著(P＜0.05)，離心冷凍組和直接冷凍組差異不顯著(P＞0.05)③囊胚率：化學(xué)去脂組和直接冷凍組差異顯著(P＜0.05)，化學(xué)去脂組和直接冷凍組差異不顯著（P＞0.05）。結(jié)果說明：化學(xué)去脂后有助于提高豬MII期卵母細胞玻璃化冷凍效果。
　　 (2)試驗二比較了開放式拉長細管法（Open pulled straws，OPS）與冷凍帽(Cryotop)、自制載體Cryotip用于豬MII期卵母細胞玻璃化冷凍的效果。結(jié)

3、果顯示：我們自行研制的冷凍片(Cryotip)與OPS（對照組1）、Cryotop（對照組2）之間在存活率、卵裂率和囊胚率各組之間差異均不顯著（P＞0.05），說明自制載體具有和成品載體一樣的冷凍效果，可以取代昂貴的商業(yè)化載體用于卵母細胞玻璃化冷凍。
　　 (3)研究了ES1+VS1、ES2+VS2、ES2+VS3、ES2+VS4四種冷凍保護劑的組合對豬MII期卵母細胞玻璃化冷凍發(fā)育效果的影響。結(jié)果顯示：①存活率、卵裂率：ES1

4、+VS1、ES2+VS2、ES2+VS3、ES2+VS4各組差異均不顯著（P＞0.05）②ES2+VS2、ES2+VS3與ES1+VS1（對照組）囊胚率上差異顯著(P＜0.05)，結(jié)果說明用不含有DMSO的冷凍保護劑冷凍豬MII期卵母細胞也是可行的。
　　 (4)分別運用含不同糖份的冷凍復(fù)蘇液實施玻璃化冷凍復(fù)蘇，研究含不同糖份的冷凍保護劑對豬MH期卵母細胞玻璃化冷凍發(fā)育效果的影響。結(jié)果顯示：①海藻糖、聚蔗糖(ficoll400)

5、與蔗糖（對照組）在存活率、卵裂率和囊胚率各組之間差異均不顯著（P＞0.05）②在海藻糖和蔗糖的冷凍保護劑中的試驗中均得到了囊胚，而在聚蔗糖中沒有得到囊胚。試驗表明：運用海藻糖玻璃化冷凍豬MII期卵母細胞是可行的。
　　 綜上所述，本研究中選用Cryotop作玻璃化冷凍載體，使用EG+DMSO+蔗糖或者海藻糖冷凍保護劑，并在豬的MII期卵母細胞玻璃化冷凍之前對其實施預(yù)處理（化學(xué)去脂），成功建立了豬的MII卵母細胞有效、經(jīng)濟、穩(wěn)定的