玻璃化冷凍對小鼠卵母細胞線粒體影響的初步研究.pdf

1、為了探索玻璃化冷凍對卵母細胞線粒體的影響，從中探尋小鼠卵母細胞的玻璃化冷凍機制以及玻璃化冷凍復(fù)蘇后卵母細胞受精率降低的影響因素，從而為改進玻璃化冷凍方法、提高玻璃化冷凍復(fù)蘇后卵母細胞受精率提供研究思路和理論依據(jù)。本論文將研究對象分為新鮮對照組、毒性暴露組和冷凍-復(fù)蘇組三組，分別通過透射電鏡技術(shù)觀察各組卵母細胞超微結(jié)構(gòu)、生物化學(xué)發(fā)光法測量各組卵母細胞內(nèi)ATP（三磷酸腺苷）含量及酶聯(lián)免疫吸附法檢測各組卵母細胞內(nèi)線粒體膜電位、分布、ROS（活

2、性氧族）含量和溶酶體分布情況。結(jié)果發(fā)現(xiàn):
　　1、冷凍-復(fù)蘇組卵母細胞凍融后有不同程度的結(jié)構(gòu)損傷，主要為:胞質(zhì)中的中間纖維解體;微絨毛變短甚至缺失;線粒體粗糙模糊;胞質(zhì)外圍皮質(zhì)顆粒數(shù)量減少;透明帶變得模糊不清，有的地方甚至已經(jīng)破裂;細胞基質(zhì)出現(xiàn)大量空泡，并且形成有線粒體-空泡復(fù)合體。
　　2、通過單因素方差分析可知，冷凍-復(fù)蘇組線粒體膜電位值（0.2443±0.03819）與新鮮對照組(0.3977±0.04329)以及毒性

3、暴露組（0.3297±0.02967）之間差異顯著(P＜0.05)，而新鮮對照組和毒性暴露組差異不顯著。
　　3、線粒體的分布情況基本上可以分為:Ⅰ型完整均勻分布，Ⅱ型極化分布，Ⅲ型成群聚集分布，Ⅳ型破損缺失。其中Ⅰ型和Ⅱ型屬于正常分布，Ⅲ型和Ⅳ型屬于異常分布。新鮮對照組線粒體以均勻分布和極化分布的正常分布為主，分布率分別為59.54％和36.42％;毒性暴露組線粒體以均勻分布和成群分布為主，分布率分別為19.63％和69.33％

4、;冷凍-復(fù)蘇組線粒體以成群分布和破損缺失分布的異常分布為主，分布率分別為56.25％和24.38％。三組卵母細胞線粒體正常分布率兩兩之間相比差異顯著（P＜0.05）。
　　4、冷凍-復(fù)蘇組卵母細胞內(nèi)ATP含量（0.212±0.013pmol/cell）和毒性暴露組卵母細胞內(nèi)ATP含量（0.248±0.006pmol/cell）均顯著性低于新鮮對照組卵母細胞（0.298±0.020pmol/cell）(P＜0.05)。
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5、、冷凍-復(fù)蘇組卵母細胞內(nèi)ROS含量為63.81±0.94cps/枚，毒性暴露組卵母細胞內(nèi)ROS含量為37.79±1.19cps/枚，新鮮對照組卵母細胞內(nèi)ROS含量為33.75±0.59cps/枚，通過單因素方差分析可知，三組卵母細胞ROS含量兩兩之間相比差異顯著(P＜0.05)。
　　6、新鮮對照組和毒性暴露組卵母細胞內(nèi)溶酶體數(shù)量相對較少，且主要分布于細胞中央?yún)^(qū)域，溶酶體周圍未見有未被著色的空隙;冷凍-復(fù)蘇后的卵母細胞溶酶體變得大