軟組織透明細胞肉瘤融合基因及組織發(fā)生研究.pdf

1、目的：探討透明細胞肉瘤石蠟包埋組織中檢測EWS-ATF1融合基因的可行性及EWS-ATF1融合基因表達在透明細胞肉瘤診斷中的意義。通過TA克隆測序分析融合基因EWS-ATF1不同的融合位點與臨床預(yù)后之間的關(guān)系。并且，通過逆轉(zhuǎn)錄酶聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)及免疫組織化學(xué)染色檢測小眼畸形相關(guān)轉(zhuǎn)錄因子(MITF)mRNA及MITF蛋白的表達來探討透明細胞肉瘤的組織發(fā)生與起源。 方法：收集確診為透明細胞肉瘤的26例福爾馬林固定石蠟包埋

2、組織標本，5例組織庫保存的冰凍新鮮組織標本，另外收集非透明細胞肉瘤標本20例，均為石蠟包埋標本，包括尤文氏肉瘤6例，原始神經(jīng)外胚層瘤5例，腺泡狀軟組織肉瘤2例，惡性黑色素瘤2例，滑膜肉瘤5例。所有標本均有HE染色切片，全部經(jīng)2名以上病理專家復(fù)讀確診：過氧化物酶染色(SP)方法對26例透明細胞肉瘤石蠟組織標本進行免疫組化染色，檢測S-100、HMB-45蛋白的表達。選取其中24例石蠟組織標本用SP方法檢測MITF蛋白的表達。5例冰凍組織標

3、本進行透射電鏡切片制作；從石蠟包埋組織及冰凍新鮮組織標本中提取RNA，β-肌動蛋白、β2-微球蛋白及GAPDH作為內(nèi)參照，用逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)和巢式PCR檢測EWS-ATF1融合基因的表達；RT-PCR方法檢測5例冰凍組織標本MITF基因mRNA的表達：對PCR產(chǎn)物進行TA克隆測序；透射電鏡：5例冰凍透明細胞肉瘤標本經(jīng)戊二醛固定，鋨酸后固定，脫水，環(huán)氧樹脂包埋，高溫聚合，作超薄切片，電鏡下觀察透明細胞肉瘤的超微結(jié)構(gòu)。

4、 結(jié)果：26例福爾馬林固定石蠟包埋組織標本檢測到22例β-肌動蛋白陽性，24例β2微球蛋白陽性，其中20例EWS-ATF1融合基因陽性，16例為EWS-ATF1I型，4例為EWS-ATF1III型，余4例EWS-ATF1融合基因陰性。對照組均未檢測到EWS-ATF1融合基因的表達。26例透明細胞肉瘤石蠟組織標本中S-100及HMB-45的總陽性率分別為79.2％、70.8％；4例透明細胞肉瘤冰凍組織標本可檢測到GAPDHmRNA表達

5、，余1例陰性；100％(4/4)檢測到MITFmRNA表達。所選取的24例CCS石蠟組織標本中MITF總陽性率為83.3％(20/24)；電鏡結(jié)果：大部分病例存在不同發(fā)育階段的黑色素小體，并可見數(shù)量不等的胞質(zhì)內(nèi)糖原、腫脹的線粒體和基底膜。 結(jié)論：在透明細胞肉瘤石蠟包埋組織中運用RT-PCR檢測EWS—ATF1融合基因是可行的：融合基因EWS—ATF1的表達可作為除免疫組化外的—輔助診斷和鑒別診斷有力工具；透明細胞肉瘤中MITF在