AMC與三種同類衍生物抗驚厥作用比較及對(duì)GABA和GABA-,C-受體ρ2mRNA表達(dá)的影響.pdf

1、目的：比較胺甲斑蝥素(AMC)、甲苯亞乙酰去甲斑蝥素(MANC)、氯苯亞甲酰胺去甲斑蝥素(CANC)、氯苯亞丁酰去甲斑蝥素(CBNC)的抗驚厥作用、毒性及其體存藥效動(dòng)力學(xué)。觀察AMC對(duì)電刺激大鼠坐骨神經(jīng)和青霉素(PNC)協(xié)同誘發(fā)癇性放電模型的對(duì)抗作用及對(duì)皮層腦電圖(EcoG)、誘發(fā)電位(CEP)、γ-氨基丁酸(GABA)、ρ2mRNA和GABAc受體表達(dá)的影響。
　　 方法：(1)采用小鼠最大電休克(MES)和印防幾毒素(PTX

2、)驚厥模型，以丙戊酸鈉(Valproate，VPA)為陽性對(duì)照，分析灌胃(ig)小鼠4種斑蝥素衍生物的驚厥潛伏期、抗驚厥率、量效和時(shí)效關(guān)系，比較各藥的抗驚厥效能；按Bliss法計(jì)算抗MES的ED50，比較其效價(jià)強(qiáng)度；(2)采用轉(zhuǎn)輪法，測(cè)定灌胃(ig)小鼠4種斑蝥素衍生物的中樞神經(jīng)系統(tǒng)(CNS)毒性作用，按Bliss法計(jì)算TD50，比較各藥的毒性；(3)采用藥效法，運(yùn)用數(shù)學(xué)模式及參數(shù)來模擬各藥在體內(nèi)的體存藥效動(dòng)力學(xué)過程；(4)建立電刺激坐

3、骨神經(jīng)和青霉素(PNC)協(xié)同誘發(fā)大鼠驚厥模型，VPA為陽性對(duì)照，以驚厥潛伏期和Racine癇性行為學(xué)分級(jí)作為評(píng)定藥效指標(biāo)，RM6240C型多道生物信號(hào)采集處理系統(tǒng)同步記錄驚厥大鼠EcoG和CEP，分析ig AMC(22mg·kg-1，88mg·kg-1)的抗驚厥作用及對(duì)EcoG癇樣波潛伏期、發(fā)放頻率、最高振幅和CEP振幅的影響。(5)采用實(shí)時(shí)熒光定量聚合酶鏈反應(yīng)技術(shù)(RT-PCR)中的SYBR GreenⅠ法檢測(cè)皮層注射兩種劑量AMC后

4、海馬區(qū)ρ2 mRNA的表達(dá)變化。(6)采用免疫組化技術(shù)，測(cè)定海馬區(qū)GABA和GABAc受體蛋白量的變化。
　　 結(jié)果：(1)抗驚厥作用比較：AMC、MANC、CANC、CBNC、VPA均可劑量依賴性抗MES發(fā)作，AMC、CBNC、VPA抗驚率均達(dá)100％，MANC、CANC為90％;ED50值由小到大分別為VPA＜AMC＜MANC＜CANC＜CBNC；五種藥物均可以延長PTX驚厥潛伏期，MANC、CANC、CBNC、VPA與PT

5、X模型對(duì)照組相比有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)，AMC與PTX模型對(duì)照組相比也有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)，抗驚厥率由大到小依次為VPA＞CANC＞MANC＞CBNC＞AMC；(2)CNS毒性比較：4種斑蝥素衍生物的TD50值由大到小分依次為：AMC＞MANC＞CBNC＞CANC，均小于VPA,(3)體存藥效動(dòng)力學(xué)參數(shù)比較：各藥的最小起效劑量由低到高為：VPA、AMC、CANC、MANC、CBNC；AMC約12min達(dá)峰，其他三藥物均在藥

6、后50分鐘左右達(dá)峰，而VPA于給藥后3小時(shí)達(dá)峰；AMC的半效期達(dá)3小時(shí)左右，在五種藥物中最大，藥效持續(xù)作用時(shí)間與VPA的相似均在15小時(shí)左右，其他三種藥物的半效期和作用持續(xù)時(shí)間均比AMC和VPA短；五種藥物中AMC消除速率常數(shù)最小；(4)AMC兩種劑量和VPA均能明顯延長大鼠驚厥潛伏期，減輕青霉素誘發(fā)大鼠驚厥發(fā)作程度，與青霉素模型組比較均有顯著性差異(P＜0.01)。同時(shí)可明顯延長癇性放電潛伏期，減少相同時(shí)間內(nèi)癇樣波發(fā)放頻率，降低最高振

7、幅和誘發(fā)電位振幅，與青霉素模型組相比有顯著性差異(P＜0.01)；(5)海馬區(qū)ρ2 mRNA測(cè)定結(jié)果：青霉素模型組ρ2 mRNA表達(dá)量(0.65±0.09)較正常組(1.00±0.10)下降，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.05)；兩種劑量AMC和VPA組表達(dá)量與青霉素模型組相比較均有明顯升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)；(6)海馬部位GABAc受體蛋白和GABA表達(dá)量各組比較：兩種劑量AMC和VPA組大鼠海馬區(qū)GABAc受體表達(dá)量較青霉素

8、模型組升高，均有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；青霉素模型組GABA表達(dá)量較正常對(duì)照組減少，有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)，兩種劑量AMC和VPA組大鼠海馬區(qū)GABA表達(dá)量較青霉素模型組明顯升高，差別有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p＜0.01)；
　　 結(jié)論：(1)AMC、MANC、CANC、CBNC、VPA均可抗MES和PTX驚厥發(fā)作。其中AMC，VPA和CBNC抗MES驚厥發(fā)作效能相似，AMC與VPA的效價(jià)強(qiáng)度相似而比其他三種衍生物大，但AMC抗

9、PTX驚厥作用較弱；(2)AMC的TC50比其他三種衍生物大，而小于VPA，其中CANC的TC50值最小，說明其毒性最大;(3)AMC在五種藥物中達(dá)峰時(shí)間最快、半效期和藥效持續(xù)時(shí)間最長、消除最慢，最低起效劑量略大于VPA而小于其他三種衍生物。(4)AMC可對(duì)抗電刺激坐骨神經(jīng)和青霉素協(xié)同誘發(fā)大鼠驚厥發(fā)作，抑制癇性放電和誘發(fā)電位振幅，產(chǎn)生顯著抗驚厥作用。(5)AMC可以提高海馬區(qū)的ρ2mRNA基因表達(dá)和GABAc受體蛋白含量，同時(shí)提高海馬區(qū)