SE大鼠海馬NKCC1、GABA-,A-Rα1表達(dá)改變及BDNF對(duì)其的影響.pdf

1、目的：觀察大鼠癲癇持續(xù)狀態(tài)(SE)后3天內(nèi)海馬組織內(nèi)NKCCI及GABAARal表達(dá)的改變，及使用BDNF中和性抗體血清（anti-BDNF）干預(yù)后其表達(dá)的變化，探討NKCC1在SE中可能機(jī)制及其與GABAARal的關(guān)系，以及BDNF在SE發(fā)生過(guò)程中對(duì)NKCC1和GABAARal表達(dá)的影響，研究其在癲癇發(fā)病機(jī)制中的作用，從而尋找癲癇新的治療靶點(diǎn)。
　　 方法：健康成年雄性SD大鼠135只，隨機(jī)分為生理鹽水對(duì)照組（15只），SE組

2、（60只）和干預(yù)組（60只）。用氯化鋰．匹羅卡品(LiCl-PILO)腹腔注射制作大鼠SE模型（SE組），在LiCl-PILO造模前3-4小時(shí)立體定向側(cè)腦室注射anti-BDNF制作干預(yù)組模型（干預(yù)組）,兩組均選取SE后2h，6h，24h，3d為實(shí)驗(yàn)點(diǎn)。觀察兩組大鼠在SE誘發(fā)過(guò)程中行為學(xué)差異，RT-PCR檢測(cè)各組大鼠海馬NKCC1、GABAARalmRNA表達(dá)改變，Western-Blot檢測(cè)NKCC1、GABAARal蛋白的表達(dá)，利用

3、免疫組化檢測(cè)海馬各區(qū)NKCC1、GABAARal時(shí)空分布的特點(diǎn)。
　　 結(jié)果：
　　 1．動(dòng)物實(shí)驗(yàn)結(jié)果：與SE組相比，干預(yù)組SE誘發(fā)成功率低（分別為90.7％和75.27％），SE誘發(fā)成功后生存狀態(tài)好，死亡率低(分別為23.08％和14.29％)。與SE組相比，干預(yù)組誘發(fā)SE所需PILO平均用量（分別為22.78±6.69mg/kg和42.78士6.69mg/kg）、誘發(fā)SE所需的平均時(shí)間(分別為41.17±18.94m

4、in和89.72±11.28min)及10％水合氯醛總量平均值(分別為0.91±0.05ml/100g和0.76±0.06ml/100g)均有明顯差異，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。
　　 2．NKCC1表達(dá)改變：SE組NKCCl的mRNA及蛋白在SE后均高于對(duì)照組(p<0.01)，2h顯著上調(diào)，6h達(dá)最高，24h后開(kāi)始恢復(fù)，3d時(shí)仍高于正常。以上各時(shí)間點(diǎn)海馬NKCC1蛋白表達(dá)亦均高于對(duì)照組(p<0.01)，在海馬不同亞區(qū)，在

5、SE后兩小時(shí)開(kāi)始，NKCC1在CAI及CA3區(qū)均顯著增高。干預(yù)組NKCC1的mRNA及蛋白表達(dá)在2h顯著增加，6h達(dá)最高，24h后開(kāi)始明顯恢復(fù)，3d時(shí)接近正常。干預(yù)組2h、6h、24h和3d蛋白含量與對(duì)照組相比差異顯著，具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(p<0.01)。NKCC1蛋白在海馬各區(qū)的時(shí)空分布趨勢(shì)與SE組相似。干預(yù)組與SE組相比，SE后各時(shí)間點(diǎn)NKCC1的表達(dá)差異非常顯著(p<0.01)。
　　 3．GABAARod表達(dá)改變：SE組GA

6、BAAR0cI的mRNA及蛋白在SE后2h—6h表達(dá)顯著下調(diào)(p<0.01)，24h繼續(xù)下降至最低值(p<0.01)，至3d突然增高(p<0.01)。GABAARal在海馬不同亞區(qū)表達(dá)SE后2h開(kāi)始CA1區(qū)及CA3區(qū)的GABAARal蛋白表達(dá)顯著進(jìn)行性下調(diào)。干預(yù)組GABAARal的mRNA及蛋白表達(dá)在SE后2h達(dá)最低值，6h后上調(diào)，3d達(dá)最高值(p<0.01)，GABAARul蛋白表達(dá)在海馬的空間分布特點(diǎn)與SE組相似。對(duì)照SE組，干預(yù)組