血管毀損術對動脈粥樣硬化斑塊內(nèi)新生血管及斑塊穩(wěn)定性影響的研究.pdf

1、實驗背景及目的：
　　動脈粥樣硬化(AS)發(fā)病率呈逐漸上升趨勢，是影響人類健康的主要疾病之一。動脈粥樣硬化中以動脈粥樣斑塊形成為典型特征。其中易損斑塊的破裂所引發(fā)的血小板聚集、血栓形成，繼而使冠狀動脈部分或完全堵塞，導致一系列的心肌缺血或梗死癥狀是臨床上常見的導致猝死的心血管意外之一。
　　易損斑塊的特征主要包括薄的纖維帽、大的脂質核、斑塊內(nèi)新生血管形成和大量炎癥細胞的積聚等。斑塊內(nèi)的新生血管是導致易損性斑塊破裂的因素之一，

2、深入研究斑塊內(nèi)新生血管與易損斑塊穩(wěn)定性的關系需要一個理想的動脈粥樣硬化動物模型。目前對動脈粥樣硬化動物模型的建立并無公認的金標準，所采用的模型主要為高脂飲食加球囊拉傷致家兔動脈粥樣硬化斑塊模型，和高脂喂養(yǎng)加頸動脈套管術所致ApoE基因敲除小鼠動脈粥樣硬化斑塊模型。本實驗中，我們在傳統(tǒng)高脂飲食加球囊拉傷所致動脈粥樣硬化兔模型的基礎上，增加干預因素，采用間斷、反復吸煙的方法，以促進動脈粥樣硬化斑塊的形成及易損性的增加。利用超聲造影檢測新生血

3、管的指標來評價所建模型的易損性。以期建立斑塊易損性更高的動脈粥樣硬化斑塊模型。
　　血管毀損術是利用超聲的空化效應所產(chǎn)生的機械性剪切撕裂、沖擊波和微射流等作用損傷血管管壁，激活外源性或內(nèi)源性的凝血機制，以誘發(fā)大面積毛細血管損傷、破壞或是栓塞，達到破壞血管的目的。目前，這種技術多應用于腫瘤血管的定向毀損研究。
　　本實驗中，嘗試采用血管毀損術靶向破壞斑塊內(nèi)的新生血管，采用超聲造影技術于術前、術后分別觀察斑塊內(nèi)新生血管的造影劑灌

4、注情況，以確定新生血管是否破裂或阻塞。本研究將新生血管作為評價斑塊易損性的一個敏感指標，用超聲造影直觀顯示斑塊內(nèi)新生血管的存在及分布情況，利用血管毀損術使斑塊內(nèi)新生血管破裂栓塞，研究其對斑塊穩(wěn)定性的影響。
　　實驗方法：
　　第一部分：建立吸煙誘導的兔動脈粥樣硬化斑塊模型：
　　在高脂喂養(yǎng)加球囊損傷血管內(nèi)皮術基礎上增加吸煙。方法如下：每日被動吸煙2次，每次1小時，共吸煙8支。喂養(yǎng)總時長為20周。實驗終點前檢測血脂三項、

5、TG、TC、LDL、ox-LDL、hs-CRP、IL-8，實驗前及實驗第8、14、20周進行超聲觀察內(nèi)膜增厚情況和斑塊形成情況，超聲造影檢測斑塊內(nèi)新生血管形成情況，處死動物后取標本進行HE、油紅O、天狼星紅染色，觀察吸煙干預后斑塊大小、形態(tài)和組織成分的改變。用抗兔巨噬細胞抗體進行免疫組化染色觀察吸煙組斑塊中巨噬細胞含量是否改變。
　　第二部分：血管毀損術對斑塊穩(wěn)定性影響的初步研究：
　　選用實驗第一部分中建立的兔動脈粥樣硬化

6、斑塊模型，分別于血管毀損術前、后進行超聲造影檢測，觀察斑塊內(nèi)新生血管數(shù)量和分布情況。對局部斑塊行血管毀損術并觀察血管受損情況，CD31抗體免疫組化染色對比新生血管數(shù)量。
　　實驗結果：
　　1.成功建立吸煙干預的兔動脈粥樣硬化模型。與單純高脂喂養(yǎng)加球囊損傷組相比，發(fā)現(xiàn)經(jīng)過吸煙干預后，ox-LDL(P<0.05 vs.高脂加球囊組)、hs-CRP(P<0.05 vs.高脂加球囊組)、IL-8(P<0.05 vs.高脂加球囊組)

7、明顯升高， TG(P>0.05 vs.高脂加球囊組)、TC(P>0.05 vs.高脂加球囊組)、LDL(P>0.05 vs.高脂加球囊組)無明顯改變。HE染色可見吸煙組斑塊脂質核心更大，斑塊纖維帽更薄。油紅O染色可見吸煙組泡沫細胞增多，巨噬細胞免疫組化染色可見吸煙組巨噬細胞變多(P<0.05 vs.高脂加球囊組)。超聲結果顯示內(nèi)膜增厚更明顯，斑塊形成也更為顯著。超聲造影顯示吸煙干預后斑塊內(nèi)新生血管明顯增多(P<0.05 vs.高脂加球囊

8、組)。
　　2.超聲造影可準確檢測動脈粥樣硬化斑塊的面積及斑塊內(nèi)新生血管分布情況。局部斑塊行血管毀損術后，造影顯示斑塊內(nèi)新生血管灌注量明顯降低，部分斑塊內(nèi)未見新生血管灌注，未行血管毀損術的斑塊和對照組均在斑塊內(nèi)見條索樣造影灌注。CD31抗體免疫組化染色顯示，術后斑塊內(nèi)新生血管明較對照組顯減少。
　　結論：
　　1.高脂喂養(yǎng)加球囊拉傷術損傷血管內(nèi)皮可造成家兔腹主動脈粥樣硬化斑塊形成。
　　2.吸煙干預可以加劇動脈粥