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文檔簡介
1、[目的]子宮肌瘤(uterine myoma)是女性生殖系統(tǒng)最常見的一種良性腫瘤,是由子宮平滑肌細(xì)胞異常增殖形成的,故又稱為子宮平滑肌瘤(uterine leiomyoma,UL)。目前已經(jīng)有明確報(bào)道表皮生長因子(Epidermal growth factor,EGF)在子宮肌瘤的發(fā)病中具有非常重要的作用,因此我們的研究目的是探討EGF在子宮肌瘤發(fā)生和發(fā)展過程中的作用機(jī)制,從而為子宮肌瘤的非手術(shù)治療提供理論依據(jù)。
[方法]
2、(1)子宮肌瘤病人術(shù)后取子宮肌瘤和鄰近正常子宮肌組織為對照,采用western blot檢測組織中EGFR(Epidermal growth factor receptor)、p44/42
MAPK(p44/42 mitogen-activated protein kinase)的表達(dá)和磷酸化水平;(2)采用酶消化法培養(yǎng)子宮平滑肌(HM-SMCs)和子宮肌瘤平滑肌(HL-SMCs),并通過細(xì)胞計(jì)數(shù)、免疫熒光、western
3、 blot等手段鑒定其生長特性;(3)100 ng/mLEGF處理HM-和HL-SMCs24 h,LSC檢測BrdU摻入率、多聚化,WST-1檢測細(xì)胞增殖;并且采用western blots檢測EGFR、p44/42 MAPK、AKT(Protein kinase B)、S6K(S6 kinase)的表達(dá)及磷酸化變化,p27蛋白的表達(dá)。
[結(jié)果]在正常子宮肌和子宮肌瘤平滑肌細(xì)胞的原代培養(yǎng)中,發(fā)現(xiàn)10%胎牛血清(fetal
4、bovine serum,FBS)無酚紅的高糖DMEM培養(yǎng)基培養(yǎng)細(xì)胞時(shí),子宮肌瘤平滑肌細(xì)胞的分化和增殖水平都較低。我們研究了子宮肌瘤與相應(yīng)的子宮肌組織水平EGFR的表達(dá)和MAPK信號(hào)通路的激活水平,發(fā)現(xiàn)與相應(yīng)的正常子宮肌組織相比,雖然在子宮肌瘤組織中總EGFR表達(dá)量低,但相對phospho-EGFR水平較高,而phospho-p44/42 MAPK水平較低。在子宮肌瘤平滑肌細(xì)胞中EGF能夠通過EGFR和MAPK信號(hào)通路刺激細(xì)胞DNA合成
5、,并且EGF的作用能夠被EGFR抑制劑AG1478和MEK抑制劑PD98059抑制;而在正常子宮平滑肌細(xì)胞沒有促進(jìn)細(xì)胞周期的作用。通過western blots實(shí)驗(yàn)檢測,我們發(fā)現(xiàn)雖然EGF對兩種細(xì)胞p44/42 MAPK的活性都有激活作用,但在正常子宮平滑肌細(xì)胞中,EGF引起p44/42 MAPK持續(xù)平穩(wěn)的激活,并且伴隨著p44/42 MAPK信號(hào)通路下游p27表達(dá)水平的上調(diào);而在子宮肌瘤平滑肌細(xì)胞中,EGF誘導(dǎo)p44/42 MAPK快
6、速瞬時(shí)的激活,并且在激活后迅速下降,最終抑制p44/42 MAPK磷酸化,此過程伴隨著p27蛋白極低水平的上調(diào)。同時(shí),我們還發(fā)現(xiàn)子宮肌瘤平滑肌細(xì)胞中,EGF誘導(dǎo)的EGFR和AKT的磷酸化水平也較低。另外,EGF抑制子宮平滑肌細(xì)胞、子宮肌瘤平滑肌細(xì)胞的增殖,但是卻能夠促進(jìn)子宮肌瘤平滑肌細(xì)胞的多聚化。
[結(jié)論]本研究表明EGF通過EGFR-p44/42 MAPK信號(hào)通路促進(jìn)HL-SMCs的DNA合成,進(jìn)而促進(jìn)細(xì)胞多聚化,為EG
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