人子宮平滑肌肉瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞的分離及其特性的初步鑒定.pdf

1、目的:從人子宮平滑肌肉瘤SK-UT-1細(xì)胞(SK-UT-1 cells)中分離和培養(yǎng)子宮平滑肌肉瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞(Uterine leiomyosarcoma stemcell like cells，ULSSCLCs)，并對(duì)其干細(xì)胞特性進(jìn)行鑒定，以揭示腫瘤干細(xì)胞(cancer stem cells，CSCs)在子宮平滑肌肉瘤發(fā)生、發(fā)展中存在重要作用。
　　方法:用含有生長因子的無血清培養(yǎng)基(Serum free medium，SFM

2、)懸浮培養(yǎng)SK-UT-1 cells，篩選出懸浮球細(xì)胞，并將其命名為子宮平滑肌肉瘤干細(xì)胞樣細(xì)胞ULSSCLCs）;采用流式細(xì)胞技術(shù)、有限稀釋法、交替在含血清培養(yǎng)基(SSM)和SFM培養(yǎng)基中培養(yǎng)、臺(tái)盼藍(lán)染色、Transwell小室、流式細(xì)胞技術(shù)分別檢測(cè)SK-UT-1 cells和ULSSCLCs干細(xì)胞表面標(biāo)志物CD133的表達(dá)差異、ULSSCLCs單個(gè)細(xì)胞成球能力、ULSSCLCs的分化能力、SK-UT-1 cells及ULSSCLCs的

3、增殖能力的差異、SK-UT-1 cells及ULSSCLCs的體外遷移、侵襲能力以及對(duì)不同濃度順鉑作用下的耐藥能力的差異。
　　結(jié)果:1、SK-UT-1 cells能在SFM中形成可以穩(wěn)定傳代的ULSSCLCs，目前已傳到第7代。2、在CD133的表達(dá)中，ULSSCLCs高于SK-UT-1 cells，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)，并且隨ULSSCLCs代數(shù)增加其表達(dá)量增高。3、有限稀釋法可以在顯微鏡下觀察到單個(gè)細(xì)胞成球全過程

4、。4、將SFM中的ULSSCLCs接種于SSM中后可重新貼壁分化，分化后細(xì)胞與SK-UT-1 cells形態(tài)無明顯差異。5、在增殖試驗(yàn)中，ULSSCLCs增殖能力強(qiáng)于SK-UT-1cells，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。6、ULSSCLCs遷移(215±14個(gè))、侵襲（161±15個(gè)）能力顯著高于SK-UT-1 cells(106±11個(gè))、(61±7個(gè))，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。7、SK-UT-1 cells和ULSS

5、CLCs經(jīng)化療藥物順鉑誘導(dǎo)凋亡48h后，DDP濃度為40μmol/L、80μmol/L、150μmol/L時(shí)，SK-UT-1 cells凋亡率高于ULSSCLCs，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)。SK-UT-1 cells和ULSSCLCs的周期分布在順鉑處理前無明顯差異(P＞0.05)，兩組細(xì)胞經(jīng)順鉑處理48小時(shí)之后:處于S期的SK-UT-1 cells細(xì)胞比例較處理前明顯減少(P＜0.05)，ULSSCLCs處于G2期的細(xì)胞比例較