環(huán)氧化酶-2對人胰腺癌生長調(diào)節(jié)作用的研究.pdf

1、中文摘要環(huán)氧化酶一2對人胰腺癌生長調(diào)節(jié)作用的研究研究目的：本課題旨在研究環(huán)氧化酶2(cyclooxygenase2，COX2)在胰腺癌中的表達(dá)，并初步探討COX2對胰腺癌新生血管生成以及胰腺癌細(xì)胞增殖與凋亡過程的調(diào)節(jié)作用。f研究方法1分別采用免疫組織(細(xì)胞)化學(xué)、逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)(RTPCR)和免疫印跡等方法研究CoX2在胰腺癌組織扣細(xì)胞株中的表達(dá)，并分析COX2表達(dá)與胰腺癌臨床指標(biāo)的關(guān)系。2用免疫組織化學(xué)研究胰腺癌組織中血管內(nèi)皮細(xì)

2、胞生長因子(VEGF)的表達(dá)，同時(shí)標(biāo)記腫瘤新生血管內(nèi)皮細(xì)胞vWF和血管壁VI型膠原，顯微鏡下計(jì)算微血管密度(MVD)；分析Cox2和VEGF的表達(dá)與MVD的關(guān)系。3用免疫組織化學(xué)研究bcl2、Bax、bak爭bclxl在胰腺癌中的表述，并用脫氧核糖核酸末端轉(zhuǎn)移酶介導(dǎo)的生物素缺g／末端標(biāo)記法(TUNEL)研究胰腺癌組織申癌細(xì)胞的凋亡。4用四唑氮藍(lán)還原法(~frr)研究選擇性CoX2抑制荊NS398和Celebrex對胰腺癌細(xì)胞株P(guān)C3增殖

3、的抑制作用：用流式細(xì)胞術(shù)、DNA電泳、電鏡等方法研究Cd曲rex對PC3細(xì)胞凋亡的影響；并用RTPCR法研究Celebrex誘導(dǎo)胰腺癌細(xì)胞凋亡的過程中bcl2家族和survivin基因表迭的變化。5采用免疫組織(細(xì)胞)化學(xué)染色和RTPCR方法研究胰腺癌組織乖細(xì)胞株中過氧物酶體活性增殖受體(PPARs)的表達(dá)。研究結(jié)果1COX2在胰腺癌組織和細(xì)胞株P(guān)C3、PANC1中呈高表達(dá)，在胰腺癌組織申表達(dá)的陽性率為875％；COX2表達(dá)強(qiáng)陽性組臨床

4、分期較晚，弱陽性陰性組臨床分期較早，Po05；COX2強(qiáng)陽性組MVD平均值顯著高于COX2弱陽性陰性組，p001。表明cOx2表迭與MVD密切相關(guān)。3胰腺癌組織中bcb2、Bax、bclXL和bak陽性率分別為54％、415％、734％和673％，凋亡指數(shù)平均為24士12‰。4NS398爭Celebrex均能抑制胰腺癌細(xì)胞株P(guān)C3的增殖，但以Celebrex的抑制作用較為顯著，且呈荊量依賴性100pMCelebrex刖茜近年來，胰腺癌的

5、發(fā)病率呈上升趨勢，速910／10萬。胰腺癌預(yù)后極差，90％以上病例死于發(fā)病后第一年，五年存活率僅為O4％llll2J。胰腺癌預(yù)后差的主要原因是惡性程度高，轉(zhuǎn)移早以及缺乏有效的治療手段。1999年首屆全國胰腺癌診治研討會(huì)對胰腺癌的診治形成了“預(yù)防、早期診斷和以手術(shù)為中心的綜合治療”的共識(shí)。可見，積極預(yù)防和尋找手術(shù)以外的化學(xué)防治手段是重要的研究方向之一。研究表明，高脂飲食尤其是6n族多不飽和脂肪酸的攝入增加與胰腺癌的發(fā)病率上升有關(guān)13j14

6、j。晚近，對脂質(zhì)代謝紊亂與腫瘤相關(guān)性的研究揭示由環(huán)氧化酶2(cyclooxygenase2，COX2)途徑導(dǎo)致的脂質(zhì)代謝紊亂是促進(jìn)消化系統(tǒng)腫瘤發(fā)生和發(fā)展的重要原因之一。一方面，致癌因子和癌基因產(chǎn)物誘導(dǎo)COX2基因表達(dá)上調(diào)，另一方面，高脂飲食又為COX2提供大量的底物，脂質(zhì)代謝紊亂進(jìn)一步促進(jìn)腫瘤惡性行為發(fā)生。COX2在腫瘤細(xì)胞內(nèi)的信息傳導(dǎo)途徑主要是通過其下游的各種前列腺素及血栓素等產(chǎn)物結(jié)合相應(yīng)的受體，包括膜受體(G蛋白偶聯(lián)受體)和核內(nèi)受體

7、(peroxisomeproliferatoractivatedrec印tors，PPARs)，而發(fā)揮其相應(yīng)效應(yīng)。尤其是PPARs，因其具有結(jié)合內(nèi)源性前列腺素的特性而引起廣泛關(guān)注。PPARs是一類核轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子，與相應(yīng)的配體結(jié)合后進(jìn)入核內(nèi)特異地識(shí)別并結(jié)合啟動(dòng)子區(qū)域的PPR元件(PPRE)，調(diào)節(jié)下游基因的表迭151?，F(xiàn)已發(fā)現(xiàn)細(xì)胞內(nèi)存在多種PPARs的天然配體，包括P№的天然配體脂氧化酶代謝產(chǎn)物L(fēng)1’B4、8SHETE，PPARy的天然配體

8、PGD2、15dPGJ2，PPAR6的天然配體PGl2等【6】。這些活性物質(zhì)的產(chǎn)生均直接或間接依賴COX2的催化活性。COX2與腫瘤的關(guān)系首先表現(xiàn)為COX2在多種腫瘤中過度表達(dá)，包括結(jié)腸癌、胃癌、食管癌、胰腺癌、前列腺癌等【7】【sJ，而且多種致癌因子(包括煙草燃燒產(chǎn)物，二羥基膽酸，6n多不飽和脂肪酸，癌基因產(chǎn)物Kiras、突變型p53等)能夠誘導(dǎo)COX2表達(dá)上調(diào)【9I。其次，流行病學(xué)調(diào)查表明，長期服用非甾體類抗炎藥物(nonstero