AF-1對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞IL-10表達(dá)和分泌的影響.pdf

1、革蘭氏陰性菌感染是引起急性肺損傷的臨床常見(jiàn)病因,革蘭氏陰性菌內(nèi)毒素主要成分脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)與體內(nèi)相應(yīng)受體結(jié)合后,在肺內(nèi)啟動(dòng)多種信號(hào)級(jí)聯(lián)放大系統(tǒng),導(dǎo)致前炎因子、炎癥介質(zhì)、化學(xué)趨化因子、黏附分子等產(chǎn)生和釋放。炎癥因子大量釋放入血,誘發(fā)炎癥瀑布級(jí)聯(lián)效應(yīng),導(dǎo)致炎癥繼續(xù)發(fā)展和放大；但在上述過(guò)程中,同時(shí)有抗炎介質(zhì)如白細(xì)胞介素10(interleukin-10,IL-10)等的合成和釋放,它們之間構(gòu)成復(fù)雜的網(wǎng)絡(luò),

2、調(diào)控炎癥的發(fā)生、發(fā)展和轉(zhuǎn)歸。而IL-10在其中發(fā)揮著重要的病理生理學(xué)作用。
　　 IL-10是一種具有抗炎作用的細(xì)胞因子,其主要生物活性表現(xiàn)為直接抑制炎癥細(xì)胞活化,進(jìn)而抑制細(xì)胞因子的產(chǎn)生。適時(shí)的、適度的IL-10的產(chǎn)生可以調(diào)節(jié)炎癥的程度,并保護(hù)正常組織免受炎癥損傷,在機(jī)體對(duì)抗感染的過(guò)程中發(fā)揮重要的保護(hù)性作用。肺泡巨噬細(xì)胞(Alveolar Macrophage)是肺內(nèi)重要的免疫防御細(xì)胞,具有趨化、吞噬和殺菌作用,是炎癥反應(yīng)中炎癥

3、因子及IL-10的重要來(lái)源細(xì)胞。
　　 Clara細(xì)胞是指襯覆于遠(yuǎn)端細(xì)支氣管的非纖毛上皮細(xì)胞,其分泌蛋白(Clara cell secretory protein,CCSP,又稱CC10)屬于子宮珠蛋白(uteroglobin,UG)家族；子宮珠蛋白是一種進(jìn)化過(guò)程中高度保守的分泌性多功能非類固醇類激素蛋白,具有抗炎、抗氧化、免疫調(diào)節(jié)、腫瘤抑制及刺激胚胎生長(zhǎng)的作用。AF-1(Antiflammin-1,AF-1)是來(lái)源于子宮珠蛋白

4、C末端第三個(gè)α螺旋的九肽,已有的研究證明AF-1具有明顯的抗炎作用。但關(guān)于AF-1的抗炎作用是否與IL-10有關(guān)卻未見(jiàn)報(bào)道。
　　 目的:
　　 1.觀察AF-1對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞IL-10分泌及表達(dá)的影響。
　　 2.檢測(cè)巨噬細(xì)胞子宮珠蛋白結(jié)合蛋白(uteroglobin-bindingprotein,UGBP)的表達(dá)。
　　 3.探討UGBP在介導(dǎo)AF-1對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞IL-10分泌及表達(dá)

5、影響中的作用,初步揭示AF-1的抗炎機(jī)制,為急性肺損傷的治療提供新的線索和思路。
　　 方法:
　　 1.應(yīng)用ELISA和RT-PCR法分別檢測(cè)巨噬細(xì)胞培養(yǎng)上清液中IL-10蛋白含量和細(xì)胞IL-10mRNA表達(dá),觀察AF-1對(duì)LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞IL-10表達(dá)的影響。
　　 2.應(yīng)用細(xì)胞免疫熒光技術(shù)及RT-PCR法檢測(cè)UGBP在巨噬細(xì)胞的表達(dá)。
　　 3.通過(guò)應(yīng)用抗-UGBP抗體預(yù)處理巨噬細(xì)胞,觀察抗-U

6、GBP多抗對(duì)于AF-1引起的LPS誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞IL-10分泌及表達(dá)的影響。
　　 結(jié)果:
　　 1.LPS可誘導(dǎo)巨噬細(xì)胞IL-10的分泌和表達(dá)增加。AF-1對(duì)正常巨噬細(xì)胞IL-10的分泌和mRNA表達(dá)無(wú)影響,但可有效促進(jìn)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞IL-10的分泌和mRNA表達(dá),并具有一定的時(shí)間、劑量依賴性。
　　 2.免疫熒光及RT-PCR實(shí)驗(yàn)均證實(shí)在巨噬細(xì)胞上有UGBP的表達(dá)。
　　 3.抗-UGBP抗體預(yù)

7、處理可抑制AF-1促進(jìn)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞IL-10的分泌及mRNA表達(dá)增加的作用。
　　 結(jié)論:
　　 1.AF-1對(duì)正常巨噬細(xì)胞IL-10的分泌和mRNA表達(dá)無(wú)影響,但可有效促進(jìn)內(nèi)毒素誘導(dǎo)的巨噬細(xì)胞IL-10的分泌和mRNA表達(dá),并具有一定的時(shí)間、劑量依賴性,提示AF-1抗炎作用的產(chǎn)生與調(diào)節(jié)IL-10的分泌和mRNA表達(dá)有關(guān)。
　　 2.本實(shí)驗(yàn)首次證實(shí)巨噬細(xì)胞上有UGBP的表達(dá)。
　　 3.本實(shí)驗(yàn)首次