硼替佐米對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞的細(xì)胞毒性效應(yīng)和細(xì)胞遷移的影響.pdf

1、本文分兩部分，第一部分：硼替佐米對(duì)微血管內(nèi)皮細(xì)胞株HMEC-1的細(xì)胞毒性效應(yīng)和細(xì)胞遷移的影響。
　　 目的：觀察0、2.5、5.0、10nmol/L硼替佐米對(duì)內(nèi)皮細(xì)胞株HMEC-1的細(xì)胞毒性效應(yīng)和細(xì)胞遷移的影響。
　　 方法：細(xì)胞計(jì)數(shù)試劑盒CCK-8檢測(cè)細(xì)胞的相對(duì)增殖活力；AnnexinV/PI雙標(biāo)法檢測(cè)細(xì)胞的凋亡率：采用Transwell模型觀察細(xì)胞遷移率的改變；
　　 結(jié)果：2.5、5.0nmol/L濃度硼替

2、佐米作用12h，對(duì)HMEC-1細(xì)胞增殖無明顯抑制作用，10nmol/L時(shí)細(xì)胞增殖活力為0.874±0.062（P=0.024，對(duì)照組細(xì)胞增殖活力設(shè)為1.0）；24h、48h時(shí)，硼替佐米表現(xiàn)了更強(qiáng)的細(xì)胞增殖抑制效應(yīng)，10nmol/L時(shí)細(xì)胞增殖活力分別為0.635±0.030、0.164±0.009（P<0.0001）。2.5、5.0、10nmol/L濃度硼替佐米分別作用細(xì)胞12h時(shí)，細(xì)胞凋亡率分別為2.0％、1.6％、2.7％，與對(duì)照組（

3、3.5％）無明顯差異，而10nmol/L濃度硼替佐米作用細(xì)胞24h時(shí)，細(xì)胞凋亡率為18.1％。2.5、5.0、10nmol/L硼替佐米作用12h均明顯降低了細(xì)胞的遷移率（P<0.05）。
　　 結(jié)論：較高濃度、較長時(shí)間的硼替佐米對(duì)微血管內(nèi)皮細(xì)胞株HMEC-1表現(xiàn)出一定的細(xì)胞毒性效應(yīng)；同時(shí)硼替佐米可有效抑制HMEC-1的遷移，并且其對(duì)遷移的抑制作用早于細(xì)胞毒性效應(yīng)的出現(xiàn)。
　　 第二部分：硼替佐米抑制微血管內(nèi)皮細(xì)胞株HME

4、C-1遷移的機(jī)制探討。
　　 目的：觀察0、2.5、5.0、10nmol/L硼替佐米作用內(nèi)皮細(xì)胞株HMEC-112h后，血管新生相關(guān)分子VEGF及Annexin A2表達(dá)的變化，以探討硼替佐米抑制細(xì)胞遷移的可能機(jī)制：并觀察HIF-1α的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性的變化，分析VEGF表達(dá)變化可能的機(jī)制。
　　 方法：實(shí)時(shí)定量PCR檢測(cè)Annexin A2、VEGF的基因表達(dá)水平，Western印跡法觀察Annexin A2在蛋白水平的變

5、化；逆轉(zhuǎn)錄PCR（RT-PCR）檢測(cè)HIF-1α轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性指標(biāo)CAIX基因表達(dá)的水平。
　　 結(jié)果：2.5、5.0、10nmol/L硼替佐米作用內(nèi)皮細(xì)胞株HMEC-112h后，均明顯抑制了Annexin A2和VEGF基因的表達(dá)（P<0.05），Western印跡同樣顯示Annexin A2在蛋白水平的表達(dá)下調(diào)，RT-PCR結(jié)果表明硼替佐米同樣抑制了HIF-1α的轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)活性的標(biāo)志基因--CAIX基因的表達(dá)。
　　 結(jié)