磺胺二甲氧嘧啶單克隆抗體的制備及免疫學快速檢測方法的建立.pdf

1、磺胺類藥物（sulfonamides,Sas)在臨床上主要用于預防和治療細菌感染性疾病，還常作為飼料添加劑在動物生產(chǎn)中長期應用。然而過量使用會引起人過敏性反應，且可能有致癌性，因此在動物性食品中殘留引起生態(tài)環(huán)境污染和人類健康危害的潛在威脅已倍受關注，而磺胺二甲氧嘧啶（SDM）在磺胺類藥物的使用中占有很大比例。因此,研究出一種操作簡便、快速、靈敏的測定Sas殘留的方法，對于畜產(chǎn)品的安檢具有實際意義。 本研究在分析磺胺二甲氧嘧啶分子

2、結構和免疫原性的基礎上，運用單克隆抗體技術生產(chǎn)了單抗，并組裝了其免疫學快速檢測試劑盒和試紙條。主要研究結果如下： 1. 用重氮化方法將SDM偶聯(lián)于牛血清白蛋白（BSA）和雞卵清蛋白（OVA），合成了人工免疫原BSA-SDM和包被抗原OVA-SDM，通過紫外（UV）、SDS-PAGE和免疫小鼠后抗血清的ELISA鑒定，表明BSA-SDM偶聯(lián)成功，獲得了高價、敏感、特異的抗血清。 2. 用BSA-SDM免疫Balb/C小鼠5

3、只，4次免疫后用間接ELISA和阻斷ELISA選擇出細胞融合備用小鼠1只，應用細胞融合技術篩選出1B4、3D9、4E1共3株敏感特異的雜交瘤細胞，用體內(nèi)誘生腹水法制備SDM mAb，經(jīng)鑒定，其間接ELISA效價細胞培養(yǎng)上清分別為1∶3.2×102、1∶5.12×102、1∶8.1×102，腹水效價分別為1∶2.56×105、1∶2.56×105、1∶5.12×105，親和常數(shù)（Ka）分別為2.16×109、3.28×109、1.71×1

4、010（L/mol），其中親和力最高的4E1株阻斷ELISA測定其IC50為16.64ng/ml，與磺胺間甲氧嘧啶的交叉反應率為5%，與其他同類化合物無CR。本實驗制備的SDM mAb可用于SDM殘留檢測的免疫學試驗。 3. 應用SDM mAb,依據(jù)酶聯(lián)免疫吸附實驗和膠體金免疫層析試驗（GICA）原理，分別組裝了SDM殘留快速檢測阻斷ELISA試劑盒和快速檢測免疫金標試紙（SDM-Strip）。SDM-Kit的標準曲線呈S型，符