SOX9與Ⅱ型膠原在小鼠MSCs三系分化中的實驗研究.pdf

1、目的：通過成骨、成軟骨、成脂肪誘導干細胞分化，分析三種分化過程以及不同時期的SOX9與Ⅱ型膠原mRNA含量的變化，探討SOX9在不同時空分布的表達規(guī)律及與Ⅱ型膠原的相關(guān)關(guān)系。
　　方法：取4周齡昆明小鼠骨髓間充質(zhì)細胞，體外培養(yǎng)得到MSCs并傳達至第3代，對所獲取的細胞進行流式細胞儀鑒定細胞表型確定為干細胞，通過流式細胞儀對干細胞進行細胞周期檢測確定細胞增殖能力屬于正常范圍確定細胞數(shù)量，共分三組每組設(shè)三個時間段，不進行誘導的細胞作為

2、對照組。通過成骨、成軟骨、成脂肪三種誘導培養(yǎng)液對三組細胞進行誘導，分別在3天、7天、14天后收集提取細胞的總RNA，通過RT-PCR進行SOX9與Ⅱ型膠原的mRNA定量檢測，同時對誘導后的細胞進行染色、免疫熒光染色，觀察其分化狀態(tài)及相關(guān)統(tǒng)計分析。
　　結(jié)果：第三代BMSCs生長良好，流式細胞儀鑒定細胞表型證實為干細胞，對誘導后細胞進行染色、免疫熒光染色結(jié)果證實細胞分化為骨、軟骨、脂肪細胞；經(jīng)RT-PCR檢測，在三組誘導分化細胞中S

3、OX9mRNA含量由高到低分別是成軟骨、成骨、成脂肪，Ⅱ型膠原mRNA含量由高到低分別是成軟骨、成脂肪、成骨。在成軟骨分化中SOX9在3天、7天是不斷升高的，14天呈下降趨勢。Ⅱ型膠原在3天、7天、14天都是逐漸升高的。在成骨分化中SOX9mRNA含量隨著時間推移而增加，而Ⅱ型膠原則隨著時間推移而不斷降低，兩組及各時間點表達含量相比較具有統(tǒng)計學意義（P<0.05）。在成脂肪分化中SOX9mRNA表達與對照組比較沒有統(tǒng)計學差異（p>0.0