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文檔簡介
1、胃癌是世界上最常見的惡性腫瘤之一,其致病率和死亡率僅次于肺癌位居第二。由于胃癌的早期癥狀并不明顯,很多患者發(fā)現(xiàn)時已處于胃癌中晚期,加之目前對胃癌的致病機(jī)制尚不完全清楚,胃癌的早期篩查還缺乏有效的技術(shù)手段,使得患者的不良預(yù)后大大增加。胃鏡活檢是目前臨床胃癌早期篩查的一種有效方法,但由于其會給人體造成強(qiáng)烈不適以及昂貴的費(fèi)用難以普及。腫瘤標(biāo)志物檢測避免了上述問題,有望成為一種胃癌早期篩查的有效方法。但現(xiàn)有的腫瘤標(biāo)志物普遍存在特異性不強(qiáng)和靈敏度
2、不高的缺點(diǎn)。
RegIV是近年來新發(fā)現(xiàn)的一種潛在的腫瘤標(biāo)志物。RegIV又名再生胰島素衍生家族基因4,是鈣依賴的植物凝集素超家族成員,于2001年作為腸炎的上調(diào)基因被分離出來。SOX9是HMG(高速泳動蛋白)DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域轉(zhuǎn)錄因子的HMG框SOX家族成員,參與性腺形成和軟骨分化等過程。但是,RegIV和SOX9在胃癌中的作用機(jī)制還不清楚。因此,本研究的重點(diǎn)在于闡釋 RegIV和 SOX9在胃癌中的表達(dá)及其參與胃癌發(fā)生的分子機(jī)
3、制。
本研究采集了195例胃癌患者的組織標(biāo)本,其中102例蠟塊組織用于免疫組織化學(xué)分析,93例新鮮胃癌手術(shù)標(biāo)本用于real-time PCR。通過免疫組織化學(xué)實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn),RegIV在胃癌組織中的表達(dá)顯著高于相應(yīng)癌旁組織(P=0.022),并且RegIV的表達(dá)與SOX9呈正相關(guān)(P=0.000)。Real-time PCR結(jié)果顯示REG4在43%(40/93)的新鮮胃癌組織樣本中高表達(dá)。REG4的mRNA水平與 SOX9也呈正相關(guān)
4、(P=0.008)。
為了進(jìn)一步驗(yàn)證 RegIV和 SOX9在胃癌中的調(diào)控關(guān)系,本實(shí)驗(yàn)在人胃腺癌細(xì)胞系MKN45中通過過表達(dá)和RNA干擾技術(shù)將REG4基因分別進(jìn)行過表達(dá)和基因沉默,并用Real-time PCR和Western blotting對SOX9的mRNA和蛋白表達(dá)水平進(jìn)行檢測,結(jié)果顯示,在蛋白水平RegIV的過表達(dá)能夠誘導(dǎo)SOX9的表達(dá),而在 mRNA水平 REG4基因過表達(dá)時 SOX9 mRNA水平下調(diào)。相應(yīng)地,R
5、EG4基因沉默后,在蛋白和mRNA水平均可抑制SOX9表達(dá)。有趣的是,如果將SOX9基因沉默,RegIV會在蛋白水平出現(xiàn)高表達(dá),這一結(jié)果說明RegIV和SOX9之間可能存在某種負(fù)反饋效應(yīng)。通過進(jìn)一步檢測REG4和SOX9過表達(dá)和沉默狀態(tài)下MKN45細(xì)胞的浸潤和遷移能力,結(jié)果發(fā)現(xiàn)REG4基因的過表達(dá)可以促進(jìn)細(xì)胞的浸潤和遷移,而REG4和SOX9沉默會導(dǎo)致MKN45細(xì)胞的浸潤和遷移能力受到抑制。
綜上所述,RegIV可能通過調(diào)控S
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