海洋錨參抗癌活性物質(zhì)分離分析.pdf

1、海洋是生命之源，海洋天然產(chǎn)物具有與陸上生物無與倫比的化學(xué)結(jié)構(gòu)奇特、新穎，并具有特異的高活性、高藥效的先導(dǎo)化合物。但長期以來，陸生天然產(chǎn)物一直是天然藥物的重要來源。在目前研究的具有新藥開發(fā)潛力的活性物質(zhì)中，海洋天然產(chǎn)物至今才1萬多種，遠(yuǎn)遠(yuǎn)少于來源于陸生植物的15萬多種天然產(chǎn)物，而海洋面積占地球面積的70％，體積占生物圈的95％，物種數(shù)量占地球生物物種總數(shù)的三分之二，目前海洋中90％以上的生物資源都沒得到開發(fā)利用，所以“向海洋要藥”、從海洋

2、生物中尋找和發(fā)現(xiàn)具有新藥開發(fā)潛力的天然先導(dǎo)化合物成為新世紀(jì)全球藥物化學(xué)研究的一個(gè)重要課題。 癌癥歷來被人們稱作絕癥，是嚴(yán)重危害人類健康的重大疾病之一，至今尚未找到完全根治的治療方法。尋找比現(xiàn)有藥物更高效的抗癌藥物成為藥物學(xué)家一直以來不懈努力的研究方向。在過去的幾十年里，海洋抗癌活性物質(zhì)的研究在海洋天然產(chǎn)物研究中一直占據(jù)重要地位。就我國來說，我國是一個(gè)海洋大國，海域遼闊，海生資源豐富，自上個(gè)世紀(jì)八十年代以來，我國海洋藥物發(fā)展迅速，

3、涉及海洋中藥、現(xiàn)代藥物、新老制劑、保健食品及已知重要成分和功效的藥用海洋生物共300余種。但是目前還沒有完全完成三期臨床實(shí)驗(yàn)用于抗癌臨床治療的成品海洋天然產(chǎn)物藥物。 論文選擇目前在天然產(chǎn)物藥物方面暫無研究的海洋環(huán)節(jié)動(dòng)物海洋錨參作為研究對象，采用化學(xué)和生物學(xué)多種技術(shù)手段相結(jié)合，利用化學(xué)手段分離純化其中的次級(jí)代謝產(chǎn)物，結(jié)合生物細(xì)胞學(xué)方法檢測其生物細(xì)胞活性和毒性。本論文共分為四個(gè)部分，主要內(nèi)容摘要如下： 第一章首先在第一節(jié)中綜

4、述了本論文的研究背景，包括海洋藥物研究的全球研究背景、國外海洋抗癌藥物研究背景和國內(nèi)的研究現(xiàn)狀。主要綜述了目前抗癌藥物研究開發(fā)出來的具有抗腫瘤活性的先導(dǎo)化合物代表和主要的活性化合物化學(xué)結(jié)構(gòu)類型。然后在第二節(jié)中概述了海洋抗癌藥物的研究方法和相關(guān)技術(shù)。最后在第三節(jié)闡述了本研究工作的目的和意義，就是要從海洋中藥海洋錨參中尋找和發(fā)現(xiàn)新的具有潛力的治療癌癥的次級(jí)代謝產(chǎn)物。 第二章詳細(xì)介紹了錨參的生物體，錨參次級(jí)代謝產(chǎn)物提取及分離的實(shí)驗(yàn)儀器

5、、藥品、方法和過程。自行搭建硅膠色譜分離系統(tǒng)能進(jìn)行中、低壓的快速硅膠柱層析。對錨參次級(jí)代謝產(chǎn)物提取物進(jìn)行萃取分離，得到乙酸乙酯萃取相部分、正丁醇萃取相部分和水溶性萃余液。然后以8cm(i.d.)的硅膠柱色譜進(jìn)行正丁醇萃取部分的初步分離。將具有藥理活性的正丁醇萃取各部分合并且濃縮后，經(jīng)歷多種直徑級(jí)別的硅膠柱色譜分離，得到一系列高度純化的化合物組分，最后以HPLC進(jìn)行進(jìn)一步的純化。并采用MTT法和磺酰羅丹明B蛋白染色法等生物細(xì)胞活性檢測法進(jìn)

6、行初步的生物活性測試，試驗(yàn)表明所獲得的純化組分具有良好的抗腫瘤活性。第三章闡述了來自海洋錨參中新的磺化甾醇Arenicolsterol A的藥理學(xué)研究。首先做了MTT法的生長抑制分析和腫瘤干細(xì)胞的集落生長抑制試驗(yàn)，結(jié)果表明化合物對子宮頸癌細(xì)胞系Hela和非小型肺癌細(xì)胞系NCI-h6有良好的細(xì)胞抑制效果，且通過抑制腫瘤干細(xì)胞分裂實(shí)驗(yàn)進(jìn)一步反映出該化合物對Hela細(xì)胞的選擇性抑制；然后進(jìn)行了應(yīng)用吖啶橙和溴乙啶的雙熒光染色、DNA凝膠電泳、流

7、式細(xì)胞儀等方法檢測細(xì)胞凋亡和對磷酸酯酪氨酸蛋白酶的抑制試驗(yàn)。闡述了ASA抗腫瘤細(xì)胞毒性的作用機(jī)理是通過作用于藥物靶點(diǎn)，導(dǎo)致癌細(xì)胞周期(如G<,2>/M期)阻滯，使難以實(shí)現(xiàn)自身修復(fù)的癌細(xì)胞啟動(dòng)細(xì)胞凋亡機(jī)制，促成細(xì)胞凋亡。 第四章初步研究了海洋錨參中提取出來的抗腫瘤因子SATF，通過SDS-PAGE電泳和HPLC等分離手段從錨參組織中純化制備SATF，結(jié)果表明其體外能夠抑制腫瘤細(xì)胞的生長，具有顯著的細(xì)胞毒性。顯微鏡下觀察到SATF各