殺松材線蟲海洋真菌H-21的分離鑒定、培養(yǎng)條件及其活性物質(zhì)研究.pdf

1、松萎蔫?。╬ine wilt disease，PWD)是松樹病害中的一種毀滅性的病害，對(duì)全球松林構(gòu)成了巨大的威脅。針對(duì)松萎蔫病的病原生物松材線蟲，本文對(duì)采自青島附近海域的樣品進(jìn)行真菌分離，并采用浸漬法對(duì)分離得到的22株真菌的培養(yǎng)濾液進(jìn)行殺線蟲活性測定，從這些菌株中篩選得到了1株具有高殺松材線蟲活性的真菌H-21，該菌株分離自貽貝。通過形態(tài)學(xué)觀察和18S rDNA序列分析，將菌株H-21鑒定為Leucostoma sp.，用其培養(yǎng)液處理松

2、材線蟲72 h時(shí)，線蟲的校正死亡率可達(dá)90.07％。對(duì)H-21的培養(yǎng)條件進(jìn)行了單因素和正交實(shí)驗(yàn)研究，確定菌株H-21在PD培養(yǎng)基中產(chǎn)生殺線活性物質(zhì)最佳的培養(yǎng)條件是：100%海水濃度，初始pH值6.0，培養(yǎng)溫度25℃，培養(yǎng)時(shí)間5 d。對(duì)菌株H-21殺線活性物質(zhì)的穩(wěn)定性進(jìn)行了初步測定，確定其活性物質(zhì)具有熱穩(wěn)定性以及在弱酸性條件下殺線活性穩(wěn)定的特點(diǎn)。對(duì)菌株發(fā)酵液進(jìn)行殺線活性組分分析，結(jié)果表明菌株培養(yǎng)濾液的乙酸乙酯萃取相具有很強(qiáng)的殺線活性，72

3、 h的殺線活性可以達(dá)到100%。利用硅膠柱層析、凝膠色譜柱層析和HPLC等對(duì)乙酸乙酯相進(jìn)行進(jìn)一步分離純化后，得到7種單體化合物，其中一種化合物在其濃度為1.0 mg/mL時(shí)殺線活性為80.68%。通過質(zhì)譜及核磁共振波譜等現(xiàn)代波譜技術(shù)將該化合物確定為fusarentin6,7-methyl ether，是一種fusarentin類殺蟲藥物。本研究可為從海洋真菌活性物質(zhì)中開發(fā)高效、低毒的微生物源殺線蟲劑及其在松萎蔫病防治方面的應(yīng)用提供理論依