“腸病及肺”的病理變化及相關(guān)調(diào)控物質(zhì)和ERK信號通路研究.pdf

1、目的：從“腸病及肺”的病理變化及相關(guān)調(diào)控物質(zhì)和ERK信號通路的研究入手，探討中醫(yī)“肺與大腸相表里”關(guān)系的科學(xué)性，尋找其實驗依據(jù)。
　　方法：采用復(fù)方地芬諾酯片灌胃方法建立大鼠便秘模型，從大鼠的糞便性狀、胃腸功能、腸道菌群微生態(tài)學(xué)、血常規(guī)檢測、ELISA法檢測血清TNF-α、IL-1、PGD2、sIgA等炎性介質(zhì)、結(jié)腸局部病理組織切片和透射電鏡下大鼠結(jié)腸組織的超微結(jié)構(gòu)等方面，對該模型進(jìn)行評價。并從病理生理學(xué)方面、微生態(tài)學(xué)、病理組織形

2、態(tài)和細(xì)胞超微結(jié)構(gòu)等方面觀察“腸病”大鼠的結(jié)腸和肺、心、肝、脾、腎等組織的變化。在大鼠便秘模型“腸病及肺”的情況下，對SP、VIP、CCK8、CGRP等相關(guān)調(diào)控物質(zhì)的表達(dá)的變化和ERK信號通路進(jìn)行研究。
　　結(jié)果：模型建立與評價：便秘模型組大鼠大便次數(shù)減少，排便困難，糞便外觀變小，質(zhì)地干硬，粒數(shù)減少、干濕重量均減輕（P<0.05），其胃內(nèi)殘留率升高（P<0.05），大腸炭末推進(jìn)率明顯低于對照組（P<0.05）；腸道菌群檢測發(fā)現(xiàn)，模型

3、組大鼠的腸道需氧菌、真菌及大腸桿菌數(shù)量顯著增多（P<0.01），而厭氧菌、類桿菌、雙岐桿菌則減少（P<0.01）；血常規(guī)檢測，模型組白細(xì)胞計數(shù)升高（P>0.05），但無統(tǒng)計學(xué)意義，中性粒細(xì)胞數(shù)顯著升高（P<0.05），淋巴細(xì)胞數(shù)無變化；ELISA檢測，便秘模型組TNF-α、IL-1、PGD2顯著升高（P<0.05），sIgA則降低（P<0.05）；光鏡下，模型組大鼠結(jié)腸表現(xiàn)為局部充血、水腫、黏膜輕度糜爛，結(jié)腸黏膜上皮欠完整，腺體排列欠規(guī)

4、則，黏膜及黏膜下大量炎細(xì)胞浸潤；電鏡觀察，模型組可見細(xì)胞核固縮，線粒體腫脹，嵴排列紊亂，少數(shù)斷裂或消失，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)減少，有脫顆?，F(xiàn)象，核糖體減少，微絨毛稀疏、雜亂。
　　“腸病及肺”過程中肺組織的病理變化和微生態(tài)學(xué)觀察：模型組大鼠的呼吸頻率較正常對照組顯著增快（P<0.05），每分鐘通氣量和潮氣量均顯著降低（P<0.05）；模型組肺部需氧菌增多，厭氧菌顯著減少，真菌顯著增多（P<0.01）；模型組肺泡結(jié)構(gòu)紊亂模糊，肺泡壁增厚明顯，

5、肺泡腔狹窄，肺泡腔內(nèi)可見少量脫落的肺泡上皮細(xì)胞及中性粒細(xì)胞，肺泡間隔增寬，部分間質(zhì)小血管周圍有淋巴細(xì)胞浸潤，部分肺泡壁毛細(xì)血管輕度擴(kuò)張充盈；而造模前后心、肝、脾、腎組織光鏡觀察，均未發(fā)現(xiàn)病理變化；電鏡觀察發(fā)現(xiàn)，模型組可見肺泡Ⅰ、Ⅱ型上皮細(xì)胞腫脹，細(xì)胞核腫脹，胞漿內(nèi)局限性透亮區(qū)，線粒體腫脹，排列紊亂，粗面內(nèi)質(zhì)網(wǎng)輕度擴(kuò)張，部分細(xì)胞器結(jié)構(gòu)不清。
　　相關(guān)調(diào)控物質(zhì)和ERK信號通路檢測：模型組結(jié)腸SP的表達(dá)比正常對照組顯著降低（P<0.05

6、），肺組織中SP的表達(dá)比正常對照組顯著升高（P<0.05）。模型組大鼠的結(jié)腸VIP的表達(dá)量比對照組顯著升高（P<0.05），肺組織中VIP的表達(dá)顯著降低（P<0.01）。模型組大鼠的結(jié)腸CCK8的表達(dá)量比正常對照組顯著升高（P<0.01），肺組織中CCK8的表達(dá)比對照組顯著降低（P<0.01）。模型組大鼠的結(jié)腸CGRP的表達(dá)量比正常對照組顯著升高（P<0.05），肺組織中CGRP的表達(dá)也顯著升高（P<0.05）。而兩組的肝、心、脾、腎等

7、組織中SP、VIP、CCK8、CGRP的表達(dá)比較均無統(tǒng)計學(xué)差異（P>0.05）。RT-PCR檢測，模型組大鼠的結(jié)腸組織中iNOS mRNA表達(dá)量較正常對照組顯著升高（P<0.01），同時，其肺組織iNOS mRNA表達(dá)量也顯著升高（P<0.01）。模型組大鼠的結(jié)腸組織中ERK表達(dá)量較對照組顯著升高（P<0.01），同時，其肺組織ERK表達(dá)量也顯著升高（P<0.01）。Western Blot檢測發(fā)現(xiàn)，模型組大鼠的結(jié)腸和肺組織中ERK表達(dá)

8、量較正常對照組均升高。
　　結(jié)論：
　?、乓詮?fù)方地芬諾酯灌胃法建立大鼠便秘模型，通過對該模型進(jìn)行評價證實造模成功。
　?、平Y(jié)腸在一定的病理變化情況下可引起肺的微生態(tài)學(xué)和組織細(xì)胞形態(tài)學(xué)等方面的改變，而其余心、肝、脾、腎四臟組織學(xué)方面皆無改變。
　　⑶相關(guān)調(diào)控物質(zhì)和ERK信號通路研究初步揭示了“腸病及肺”情況下二者之間的某種關(guān)聯(lián)性，表明ERK信號途徑可能參與了大鼠“腸病及肺”的發(fā)病機(jī)制及該病理過程的調(diào)控，并在其發(fā)病與