Mek-Erk信號通路調(diào)控Nanog基因表達的研究.pdf

1、胚胎干細胞（embryonic stem cell，ESCs，簡稱ES細胞）是早期胚胎中分離出來的一類高度未分化細胞，它具有體外培養(yǎng)無限增殖、自我更新和多向分化的特性。促有絲分裂原活化蛋白激酶(mitogen-activated protein kinases, MAP激酶,MAPK)鏈是真核生物信號傳遞網(wǎng)絡中的重要途徑之一，主要介導了細胞的生長、發(fā)育、分裂及分化等過程,包括p38、JNK、Mek-Erk這三條信號通路。已有研究表明，在

2、可誘導過表達iRas穩(wěn)定系中誘導Ras表達可以下調(diào)Nanog的蛋白水平，而這一下調(diào)作用可以在加入Mek特異性抑制劑（PD98059）后得到一定程度的恢復，暗示了Mek對Nanog的抑制作用。
　　為了探究Mek是如何調(diào)控Nanog基因表達的，我們構建了定點整合的可誘導過表達caMek1、caErk1、caErk2的穩(wěn)定系，發(fā)現(xiàn)caMek1抑制Nanog表達，而其下游的兩個經(jīng)典激酶Erk1、Erk2對Nanog的抑制作用不明顯。為了

3、進一步證實這一結論，我們通過 CRISPR/Cas技術進一步構建了可誘導過表達 caMek1中 Erk1敲除的穩(wěn)定系，并在此細胞系中用siRNA敲低Erk2，發(fā)現(xiàn)Erk水平較低情況下， caMek1仍能抑制Nanog表達。由于Erk1/2高度的氨基酸同源性和功能互補性，單獨敲除一個基因不足以說明問題，只有Erk1/2同時敲除才能闡明問題，目前Erk敲除的ES細胞系還沒有建立，因此我們嘗試構建Erk1/2雙敲的ES細胞系。在此過程中我們發(fā)

4、現(xiàn)Erk1/2雙敲可使ES細胞致死。最終我們構建了可誘導Erk1中Erk敲除的ES細胞系iErk1-Erk KO，撤掉Doxycycline（Dox）時模擬Erk雙敲，發(fā)現(xiàn)在Erk水平極低的情況下ES細胞不能進行正常的EB分化和神經(jīng)分化，但不影響多能性基因的下調(diào)。此時Nanog還能響應Mek抑制劑PD0325901和外源過表達的caMek1，但Mek1對Nanog的抑制效果降低，暗示了Erk部分介導了Mek1對Nanog的抑制作用，可能