LASIK術(shù)中瞬時高眼壓對視網(wǎng)膜NO-NOS及凋亡基因的影響.pdf

1、目的研究LASIK術(shù)中不同持續(xù)時間的負(fù)壓吸引引起的瞬時高眼壓對視網(wǎng)膜組織中NO含量及NOS活力及其對視網(wǎng)膜基因譜的影響,并進(jìn)行綜合分析與評價,探索LASIK手術(shù)中瞬時高眼壓引起視網(wǎng)膜神經(jīng)節(jié)細(xì)胞凋亡的相關(guān)機制。方法1.實驗分組與動物模型制作:將實驗用68只新西蘭大耳白兔隨機分為正常對照組、實驗對照組、負(fù)壓吸引20s組、負(fù)壓吸引45s組和負(fù)壓吸引3min組,負(fù)壓吸引時間分別持續(xù)20s、45s及3min,模擬LASIK手術(shù)過程,實驗對照組僅進(jìn)

2、行激光消融。2.視網(wǎng)膜組織中一氧化氮及一氧化氮合成酶水平測定:各組分別于術(shù)后即刻(0d)、7d、10d、14d、28d處死動物,按NO/NOS試劑盒說明進(jìn)行操作,利用752型分光光度計測各組視網(wǎng)膜組織分光光度值,按公式進(jìn)一步計算視網(wǎng)膜組織中NO含量及NOS活力。3.視網(wǎng)膜組織基因芯片分析:取正常視網(wǎng)膜組織、負(fù)壓吸引3min術(shù)后即刻、7天和10天視網(wǎng)膜組織進(jìn)行Agilent單通道表達(dá)譜芯片測定及分析基因譜,觀察LASIK手術(shù)過程中凋亡相關(guān)

3、基因的變化情況。結(jié)果1.視網(wǎng)膜組織中NO含量及NOS活力變化:實驗對照組NO含量及NOS活力與正常對照組相比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。負(fù)壓吸引20s組、45s組,術(shù)后不同修復(fù)時間視網(wǎng)膜組織中NO含量及NOS活力比較均無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05),負(fù)壓吸引20s組、45s組與正常對照組比較差異均無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)。負(fù)壓吸引3min組,術(shù)后不同修復(fù)時間視網(wǎng)膜組織中NO含量及NOS活力與正常對照組相比較:術(shù)后即刻(0d)

4、與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)；術(shù)后修復(fù)7d、10d與正常對照組比較差異均有統(tǒng)計學(xué)意義(p<0.05)；術(shù)后修復(fù)14d、28d與正常對照組比較差異無統(tǒng)計學(xué)意義(p>0.05)；術(shù)后修復(fù)7d視網(wǎng)膜組織中NO含量及NOS活力達(dá)高峰。No/NOS的變化呈正相關(guān)性。2.基因芯片分析表明:①負(fù)壓吸引3min術(shù)后即刻與正常對照組相比差異表達(dá)的基因共有704條。上調(diào)基因為485條,其中已知基因為48條,下調(diào)基因為219條,其中已知基

5、因為23條；②負(fù)壓吸引3min術(shù)后7天與正常對照組相比差異表達(dá)的基因共有482條。上調(diào)基因為178條,其中已知基因為13條；下調(diào)基因為304條,其中已知基因為33條；③負(fù)壓吸引3min術(shù)后10天與正常對照組相比差異表達(dá)的基因共有402條。上調(diào)基因為213條,其中已知基因為25條；下調(diào)基因為189條,其中已知基因為26條。其中與凋亡相關(guān)的基因如NF-kB、bcl-2、p53、Fas等均未表現(xiàn)出有意義的改變。結(jié)論 LASIK術(shù)中常規(guī)負(fù)壓吸引