鑒別PRRS野毒株與TJM-F92疫苗株間接ELISA方法的建立與初步應(yīng)用.pdf

1、豬繁殖與呼吸綜合征（porcine reproductive and respiratory syndrome，PRRS）是引起母豬繁殖障礙和仔豬呼吸道癥狀并造成免疫抑制的病毒性傳染病，尤其是在2006年高致病性豬繁殖與呼吸綜合征(highly pathogenic porcine reproductive and respiratory syndrome, HP-PRRS)大范圍爆發(fā)和流行，給我國(guó)養(yǎng)豬業(yè)造成巨大的損失。目前我國(guó)主要依靠

2、接種疫苗和執(zhí)行嚴(yán)格生物安全措施進(jìn)行PRRS的防控，而中長(zhǎng)期防治PRRS需進(jìn)一步的凈化豬群。
　　高致病性豬繁殖與呼吸綜合征病毒TJM-F92疫苗株（HP-PRRSV TJM-F92）是HP-PRRSV TJ株在細(xì)胞上連續(xù)傳代至92代所得弱毒疫苗株。TJM-F92的非結(jié)構(gòu)蛋白2（non-structural protein2， Nsp2）存在一段連續(xù)的120個(gè)氨基酸缺失。本研究利用表達(dá)TJM-F92疫苗株Nsp2蛋白上連續(xù)缺失的12

3、0個(gè)氨基酸的原核表達(dá)質(zhì)粒GST-Nsp2-d120表達(dá)蛋白GST-d120，并將純化的GST-d120蛋白作為包被抗原，建立并優(yōu)化了鑒別診斷PRRSV野毒感染和弱毒活疫苗TJM-F92免疫動(dòng)物的間接酶聯(lián)免疫吸附實(shí)驗(yàn)(enzyme-linked immunosorbent assay, ELISA)方法，命名為d120-ELISA。建立d120-ELISA后，采用受試者工作曲線方法對(duì)270份血清的OD值進(jìn)行分析，確定d120-ELISA的

4、陰陽(yáng)性臨界S/P值為0.25。當(dāng)S/P值為0.25時(shí)，d120-ELISA的敏感性為90.7％，特異性為95.1%；d120-ELISA檢測(cè)其他常見(jiàn)豬病陽(yáng)性血清的結(jié)果表明其具有 PRRS特異性；重復(fù)性試驗(yàn)結(jié)果顯示變異系數(shù)在0.77~17.02%；以上結(jié)果表明d120-ELISA具有良好的特異性、敏感性、重復(fù)性。與商品化試劑盒對(duì)比結(jié)果顯示，檢測(cè)野毒感染或其他弱毒活疫苗免疫陽(yáng)性血清的符合率為90.7%，檢測(cè)PRRSV陰性血清的符合率為92.

5、2%，商品化試劑盒檢測(cè)為陽(yáng)性的TJM-F92或滅活疫苗免疫血清，d120-ELISA檢測(cè)全為陰性，表明 d120-ELISA能夠區(qū)分 PRRSV野毒感染與弱毒活疫苗TJM-F92免疫動(dòng)物。
　　為進(jìn)一步驗(yàn)證鑒別d120-ELISA方法能夠區(qū)分野毒感染與弱毒活疫苗 TJM-F92免疫動(dòng)物，本研究通過(guò)采集10頭試驗(yàn)動(dòng)物210份血清進(jìn)行血清動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)，同時(shí)采集具有明確免疫背景的150份臨床血清進(jìn)行鑒別d120-ELISA方法的臨床初步應(yīng)

6、用。血清動(dòng)力學(xué)試驗(yàn)和臨床血清檢測(cè)結(jié)果均表明d120-ELISA檢測(cè)陽(yáng)性抗體時(shí)間晚于IDEXX10 d左右，但d10-ELISA方法可以鑒別出IDEXX試劑盒無(wú)法鑒別的免疫弱毒活疫苗TJM-F92或免疫滅活疫苗豬群中發(fā)生野毒感染的動(dòng)物。
　　綜上所述，本實(shí)驗(yàn)建立了具有良好敏感性、特異性和重復(fù)性的鑒別PRRSV野毒感染和弱毒活疫苗 TJM-F92免疫動(dòng)物的 d120-ELISA方法，檢測(cè)試驗(yàn)動(dòng)物血清和臨床血清結(jié)果表明d120-ELIS