組胺改善戊四唑點燃癲癇大鼠記憶障礙的機(jī)制研究.pdf

1、背景:
　　癲癇是嚴(yán)重危害人類身心健康的常見的發(fā)作性中樞神經(jīng)系統(tǒng)疾病之一。據(jù)統(tǒng)計，癲癇發(fā)病率為5‰-7‰，全球約有9000萬患者，我國約有650-910萬患者。癲癇的危害不僅來自癲癇發(fā)作本身，還來自長期癲癇發(fā)作帶來的記憶障礙等認(rèn)知損害。2012年最新發(fā)表于《Pediatrics》雜志報道指出，有癲癇發(fā)作的兒童人群并發(fā)注意缺陷、行為問題及精神發(fā)育遲滯較無癲癇發(fā)作的兒童人群高4-20倍。在顳葉癲癇（成人期起病的最常見癲癇）甚至有人認(rèn)為

2、記憶問題比發(fā)作本身危害性更大。因此，癲癇導(dǎo)致的記憶障礙給社會和家庭帶來了沉重的經(jīng)濟(jì)負(fù)擔(dān)及其他一系列負(fù)面效應(yīng)。但是，癲癇導(dǎo)致記憶障礙的發(fā)病機(jī)制遠(yuǎn)未被闡明，目前世界上對癲癇導(dǎo)致記憶障礙的處理僅停留在預(yù)防上，缺乏有效的治療手段;臨床上使用的大部分抗癲癇藥物對記憶能力也可能造成損害。因此研究癲癇導(dǎo)致記憶障礙的發(fā)病機(jī)制具有重要理論和臨床意義。組胺能神經(jīng)元的胞體位于下丘腦后部的結(jié)節(jié)乳頭核，該神經(jīng)元在腦內(nèi)有著廣泛而彌散的投射。組胺能神經(jīng)系統(tǒng)通過其三大

3、類受體（H1，H2和H3）參與了許多中樞功能的調(diào)節(jié)，如睡眠-覺醒周期，情緒，食欲，動物的自發(fā)活動，應(yīng)激反應(yīng)，神經(jīng)內(nèi)分泌以及學(xué)習(xí)和記憶等。我們以前的研究提示戊四唑點燃癲癇大鼠的腦內(nèi)組胺功能受損，激活腦內(nèi)組胺功能可改善戊四唑點燃癲癇導(dǎo)致的大鼠記憶再現(xiàn)能力下降。
　　目的:
　　研究戊四唑點燃癲癇是否會導(dǎo)致大鼠空間記憶獲得障礙，分析戊四唑點燃癲癇大鼠的空間記憶獲得障礙的特點;研究戊四唑點燃癲癇是否會導(dǎo)致大鼠腦內(nèi)組胺水平的下降，分析

4、戊四唑點燃癲癇大鼠腦內(nèi)組胺水平下降的時空特點;然后研究組胺是否可改善戊四唑點燃癲癇大鼠的空間記憶獲得障礙;最后研究組胺改善戊四唑點燃癲癇大鼠空間記憶獲得障礙的機(jī)制，即組胺是通過哪個突觸后受體、哪條信號轉(zhuǎn)導(dǎo)途徑來發(fā)揮改善戊四唑點燃癲癇大鼠的空間記憶獲得障礙的？
　　方法:
　　SD大鼠隔日腹腔內(nèi)注射亞驚厥劑量（35 mg/kg）的戊四唑誘發(fā)化學(xué)點燃癲癇。成功建立大鼠戊四唑點燃癲癇模型后24小時、1周、2周和3周時用Morris

5、水迷宮測試大鼠的空間記憶獲得能力，用化學(xué)熒光法測定不同腦區(qū)組胺的含量。了解了戊四唑點燃癲癇大鼠空間記憶獲得能力受損的時間變化特點后，于點燃后1周腹腔內(nèi)注射不同劑量的組氨酸（200 mg/kg，500 mg/kg和1000 mg/kg，組胺的前體物質(zhì)）以提高腦內(nèi)組胺含量，訓(xùn)練期間每天注射一次，在第一次訓(xùn)練前半小時注射，研究組胺對戊四唑點燃癲癇大鼠空間記憶獲得障礙是否具有改善作用。這些大鼠在最后一次訓(xùn)練后斷頭取腦，分離出海馬，置于-80℃?zhèn)?/p>

6、用。最后，為研究組胺改善戊四唑點燃癲癇大鼠空間記憶獲得障礙的機(jī)制，我們還應(yīng)用了藥理學(xué)方法、分子生物學(xué)方法，具體方法如下:成功建立戊四唑點燃癲癇模型后1周，用Morris水迷宮測試戊四唑點燃癲癇大鼠的空間記憶獲得能力。組胺相關(guān)藥物在訓(xùn)練期間每天腹腔注射一次，均在第一次訓(xùn)練前半小時給予。用藥的方案有:組氨酸(0 mg/kg)+組胺H1受體拮抗劑pyrilamine（0 mg/kg）、組氨酸(1000 mg/kg)+組胺H1受體拮抗劑pyri

7、lamine（0 mg/kg）、組氨酸（1000 mg/kg）+組胺H1受體拮抗劑pyrilamine(4 mg/kg)、組氨酸(1000 mg/kg)+組胺H1受體拮抗劑pyrilamine（10 mg/kg）和組氨酸(1000 mg/kg)+組胺H1受體拮抗劑pyrilamine(20 mg/kg);組氨酸（0 mg/kg）+組胺H2受體拮抗劑zolantidine(0 mg/kg)、組氨酸（1000 mg/kg）+組胺H2受體拮抗

8、劑zolantidine（0 mg/kg）、組氨酸（1000 mg/kg）+組胺H2受體拮抗劑zolantidine(4 mg/kg)、組氨酸(1000 mg/kg+組胺H2受體拮抗劑zolantidine(10 mg/kg)和組氨酸（1000 mg/kg）+組胺H2受體拮抗劑zolantidine（20 mg/kg）。前面?zhèn)溆玫暮ｑR組織，用Western blot法測定磷酸化蛋白激酶A(phospho proteinkinase A，

9、p-PKA)和磷酸化環(huán)磷腺苷反應(yīng)元件結(jié)合蛋白（phospho cAMP-responseelement binding protein，p-CREB）的表達(dá)水平。
　　結(jié)果:
　　成功建立戊四唑點燃癲癇模型后24小時、1周和2周，大鼠在Morris水迷宮的空間記憶獲得能力下降，表現(xiàn)為逃脫潛伏期較對照組明顯延長。戊四唑點燃癲癇模型成功后第3周大鼠空間記憶獲得能力恢復(fù)，表現(xiàn)為逃脫潛伏期與對照組相比無顯著性差異。成功建立戊四唑點燃

10、癲癇模型后24小時、1周和2周，大鼠海馬、丘腦、下丘腦組胺含量較對照組明顯下降，至第3周組胺含量上升至對照組水平。成功建立戊四唑點燃癲癇模型后1周時測試組氨酸對癲癇導(dǎo)致的記憶獲得能力障礙的影響，發(fā)現(xiàn)腹腔注射組氨酸劑量依賴性地改善了戊四唑點燃癲癇大鼠的空間記憶獲得障礙，表現(xiàn)為與不用組氨酸的戊四唑點燃癲癇大鼠相比，500mg/kg的組氨酸使訓(xùn)練第3天脫逃潛伏期明顯下降，1000 mg/kg的組氨酸使訓(xùn)練第2天和第3天逃脫潛伏期明顯下降。組胺

11、H2受體拮抗劑zolantidine劑量依賴性的逆轉(zhuǎn)了組氨酸（1000 mg/kg）對戊四唑點燃癲癇大鼠空間記憶獲得障礙的改善作用，表現(xiàn)為與組氨酸(1000 mg/kg)+組胺H2受體拮抗劑zolantidine（0 mg/kg）組相比，組氨酸（1000 mg/kg）+組胺H2受體拮抗劑zolantidine(10 mg/kg)使訓(xùn)練第3天脫逃潛伏期明顯延長，組氨酸（1000 mg/kg）+組胺H2受體拮抗劑zolantidine（20

12、 mg/kg）使訓(xùn)練第2天和第3天逃脫潛伏期明顯延長。但組胺H1受體拮抗劑pyrilamine即使在20 mg/kg劑量時都不明顯影響組氨酸的改善作用。癲癇模型成功建立后1周，戊四唑點燃癲癇大鼠在Morris水迷宮訓(xùn)練后，其海馬區(qū)的p-PKA和p-CREB的水平明顯低于對照組（非癲癇組），而組氨酸則劑量依賴性的增加了戊四唑點燃癲癇大鼠海馬區(qū)p-PKA和p-CREB的水平。
　　結(jié)論:
　　戊四唑點燃癲癇大鼠空間記憶獲得能力下