一株產(chǎn)鬼臼毒素內(nèi)生真菌發(fā)酵條件的研究.pdf

1、鬼臼毒素是一種具有抗腫瘤和殺蟲(chóng)活性的木脂素類(lèi)化合物，不僅是治療尖銳濕疣的良好藥物，亦是合成多種治療癌癥藥物的前體物質(zhì)，具有很大的藥用價(jià)值，因而，人們對(duì)鬼臼毒素的需求量日益增加。但是目前多數(shù)報(bào)道都是有關(guān)從植物中分離篩選產(chǎn)生鬼臼毒素菌株的研究，而利用微生物發(fā)酵生產(chǎn)鬼臼毒素的報(bào)道甚少，因此如何利用微生物發(fā)酵擴(kuò)大生產(chǎn)鬼臼毒素、如何對(duì)發(fā)酵物中的鬼臼毒素進(jìn)行定量測(cè)定成為人們研究的熱點(diǎn)。 目的：研究Ty菌株發(fā)酵生產(chǎn)鬼臼毒素的最佳發(fā)酵條件；建立

2、對(duì)發(fā)酵過(guò)程中鬼臼毒素定量測(cè)定的方法。方法：根據(jù)微生物發(fā)酵的特點(diǎn)，借鑒采用薄層掃描測(cè)定藥用植物中活性物質(zhì)含量的方法，確定對(duì)發(fā)酵物中鬼臼毒素含量的檢測(cè)方法；根據(jù)PDA培養(yǎng)基配方的成分設(shè)計(jì)適于Ty菌株發(fā)酵的合成培養(yǎng)基，并通過(guò)pH、接種量、裝液量和發(fā)酵時(shí)間的篩選對(duì)Ty利用此合成培養(yǎng)基發(fā)酵的條件進(jìn)行優(yōu)化；采用常用真菌鑒定方法對(duì)Ty進(jìn)行鑒定。結(jié)果：通過(guò)精密度、穩(wěn)定性試驗(yàn)，并測(cè)定加樣回收率確定采用薄層掃描法定量測(cè)定發(fā)酵物中鬼臼毒素含量；合成培養(yǎng)基的最

3、佳配方為：3％淀粉、1.5％蔗糖、1.5％葡萄糖、0.05％蛋白胨、0.05％酵母膏、0.075％K2HPO4和0.075％NaCl，優(yōu)化后的發(fā)酵條件為：初始pH值為6.5，接種量為2.5％的孢子懸液，最適裝液量為80mL/250mL錐形瓶，培養(yǎng)時(shí)間為7天；通過(guò)高效液相色譜(HPLC)和氫核磁共振譜分析，確定培養(yǎng)基的改變并沒(méi)有對(duì)產(chǎn)物性質(zhì)和成分產(chǎn)生影響。經(jīng)初步鑒定Ty屬于半知菌亞門(mén)，叢梗孢目，暗梗孢科，交鏈孢霉屬(AlternariaNe