金線蓮中一株內(nèi)生真菌活性成分研究.pdf

1、植物內(nèi)生真菌是新化合物和生物活性小分子的重要來源，且能產(chǎn)生出與宿主植物中相同或相似的生物活性成分。通過人工培養(yǎng)藥用植物中的內(nèi)生真菌，可從中尋找具有低毒性且結(jié)構(gòu)新穎的活性化合物，從而對瀕危藥用植物資源起到積極保護作用。金線蓮為福建省道地藥材，目前針對于金線蓮中內(nèi)生真菌相關(guān)研究較少。在前期試驗中，從93株金線蓮內(nèi)生真菌中篩選出三株具有ERα激活活性的菌株ARL-13、ARL-09和ARTCL-05，其中菌株ARL-13具有特異性的ERα激活

2、活性。本課題主要目標是從ARL-13菌株中分離純化出能激活ERα轉(zhuǎn)錄活性化合物，并驗證其是否具有特異性激活ERα轉(zhuǎn)錄作用。
　　本課題采用PDA培養(yǎng)基對菌株ARL-13進行大規(guī)模固體發(fā)酵，經(jīng)過提取、濃縮、萃取后，得到粗提物浸膏。利用正相硅膠色譜柱、ODS中低壓色譜柱、葡聚糖凝膠色譜柱、重結(jié)晶、分析型和制備型HPLC等現(xiàn)代分離分析技術(shù)對浸膏進行分離純化得到7個化合物。利用現(xiàn)代光譜技術(shù)，如MS，IR，UV和NMR等技術(shù)對所獲得的單體化

3、合物進行結(jié)構(gòu)鑒定，得到5個雙苯吡酮類的化合物，1個異香豆素類化合物，1個酚酸類化合物，其中化合物1為新天然產(chǎn)物。
　　本文采用Dual-Luciferase雙熒光素酶報告基因檢測系統(tǒng)通過測定熒光素酶的相對活力的強弱來評估單體化合物能否激活ERα的轉(zhuǎn)錄活性。活性測定結(jié)果表明:化合物4和化合物5具有一定的激活ERα的轉(zhuǎn)錄活性，化合物4活性強于化合物5，且化合物4的激活作用呈濃度依賴性。另外化合物4對ERα轉(zhuǎn)錄功能存在特異性的調(diào)控作用，

4、化合物4在10μM條件下激活pBIND-ERα-LBD的轉(zhuǎn)錄活性可達到10nM時陽性藥雌二醇E2激活的一半。利用熒光分光光度計進行熒光滴定，進一步證實化合物4能與ERα-LBD結(jié)合，結(jié)合常數(shù)為5.02～6.92×10-7M-1。通過構(gòu)效關(guān)系討論提示3位羥基可能為活性基團，而3位羥基甲基化后可能對ERα轉(zhuǎn)錄活性具有一定抑制作用。
　　以金線蓮中內(nèi)生真菌為研究對象，對發(fā)現(xiàn)新的天然產(chǎn)物和豐富次級代謝產(chǎn)物具有重要意義，同時也是發(fā)現(xiàn)新的活性