馬鞍藤產(chǎn)樹(shù)脂糖甙內(nèi)生真菌的篩選及發(fā)酵條件優(yōu)化.pdf

1、馬鞍藤是一種含有很多活性物質(zhì)的固沙植物和藥用植物，在環(huán)境綠化和醫(yī)藥方面有很好的利用價(jià)值。有很多研究通過(guò)化學(xué)方法從馬鞍藤中提取出了許多有用的物質(zhì)，其中樹(shù)脂糖甙作為番薯屬植物的特征化學(xué)成份，具有新穎的化學(xué)結(jié)構(gòu)和多樣的生物活性，為新化合物的合成和新藥物的研制提供了很好的依據(jù)。本試驗(yàn)從馬鞍藤中篩選出一株能產(chǎn)生樹(shù)脂糖甙的內(nèi)生真菌MJ8，鑒定出目標(biāo)菌株并進(jìn)行發(fā)酵條件的優(yōu)化來(lái)提高樹(shù)脂糖甙的產(chǎn)量。試驗(yàn)結(jié)果如下：
　　1）采用組織分離法，從馬鞍藤的

2、莖和葉中分離出內(nèi)生真菌120株，然后通過(guò)搖瓶發(fā)酵對(duì)分離出的內(nèi)生菌進(jìn)行篩選，將發(fā)酵液通過(guò)柱層析和蒸餾后采用薄層色譜法與標(biāo)準(zhǔn)品對(duì)照。最終篩選出一株內(nèi)生真菌MJ8可以產(chǎn)生樹(shù)脂糖甙。
　　2）首先通過(guò)形態(tài)學(xué)方法，觀察MJ8的菌落、菌絲和分生孢子形態(tài)，初步歸類(lèi)為擬盤(pán)多毛孢屬真菌，然后運(yùn)用分子生物學(xué)方法分析18S rDNA序列和ITS序列并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹(shù)，結(jié)果表明MJ8可能為一株新的擬盤(pán)多毛孢屬真菌。
　　3）首先通過(guò)單因素試驗(yàn)確定發(fā)酵

3、的氮源、碳源和發(fā)酵時(shí)間，并確定PDB培養(yǎng)基內(nèi)部各種物質(zhì)的最佳條件，然后通過(guò)Plackett-Burman試驗(yàn)篩選出對(duì)試驗(yàn)結(jié)果有顯著影響的4個(gè)因子乳糖、硫酸銨、溫度和接種量，最后采用Box-Behnken試驗(yàn)進(jìn)行響應(yīng)面分析確定了發(fā)酵的最佳條件為乳糖濃度40.200g/L，硫酸銨濃度13.800g/L，溫度31.8℃，接種量5％，硫酸亞鐵濃度0.010g/L，氯化鉀濃度2.000 g/L，硫酸鎂濃度0.500 g/L，磷酸氫二鉀2.000