瘦素在大鼠氣道平滑肌細胞增殖和凋亡中的作用及其作用機制.pdf

1、目的：探討瘦素對大鼠氣道平滑肌細胞(ASMCs)增殖和凋亡的影響及其作用機制。
　　 方法：體外培養(yǎng)大鼠ASMCs。用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈式反應（RT-PCR法）和Westernblot法測定ASMCs瘦素受體的表達。不同濃度的瘦素（0、20、40、60、80及100ng/ml）干預培養(yǎng)大鼠ASMCs不同時間(1、12、24、48及72h)后，CCK-8法測定增殖情況，Annexin-V FITC/PI雙染色法測定細胞凋亡率。不同濃度

2、瘦素(0、20、40、60、80及100ng/ml)作用于ASMCs48h后，Western blot法測定磷酸化細胞外調(diào)節(jié)蛋白激酶(p-ERK)和磷酸肌醇3激酶(PI-3K)的表達。
　　 結(jié)果：1.Western blot和RT-PCR法檢測瘦素受體的表達Western blot結(jié)果示在95kb與130kb之間有明顯條帶，與瘦素受體120kb大小相符。RT-PCR電泳結(jié)果示在500bp處有明顯條帶，其大小與瘦素受體目的基因片

3、段大小相符。以上均說明AMSCs上有瘦素受體表達。
　　 2．瘦素對ASMCs增殖的影響20-100ng/ml瘦素作用于ASMCs1、12、24、48及72h后，各濃度組OD值較空白對照組顯著升高（P＜0.05）。瘦素對ASMCs增殖的誘導作用與濃度、時間呈正相關(guān)，Pearson相關(guān)分析得出前者r=0.837，P＜0.01;后者r=0.874，P＜0.01。
　　 3．瘦素對ASMCs凋亡的影響20-100ng/ml瘦素

4、作用于ASMCs48h后，各濃度組細胞凋亡率與空白對照組相比無統(tǒng)計學意義（P＞0.05）。
　　 4.PI-3K、p-ERK的表達Western blot結(jié)果示在36kb與56kb之間，72kb與95kb之間均有明顯條帶。對照組相比，p-ERK、PI-3K蛋白表達顯著增高并與瘦素濃度呈正相關(guān)（前者r=0.793，P＜0.01，后者r=0.746，P＜0.01）。
　　 結(jié)論：大鼠ASMCs表面有瘦素受體的表達。瘦素促進體