蠶蛹蛋白肽的制備及其功能活性研究.pdf

1、蛋白質(zhì)是由各種氨基酸相互聯(lián)接而構(gòu)成的具有空間結(jié)構(gòu)的生物大分子，其理化性質(zhì)和功能特性直接相聯(lián)系。蛋白質(zhì)改性就是用生化因素或物理因素使氨基酸和多肽鏈發(fā)生某種變化，引起蛋白質(zhì)大分子空間結(jié)構(gòu)和理化性質(zhì)的改變，從而獲得較好功能特性和營養(yǎng)特性的蛋白質(zhì)。 肽是由兩個以上的氨基酸分子聯(lián)結(jié)而成，是構(gòu)成蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)片段，也是蛋白質(zhì)發(fā)揮作用的活性基因部分，是機體完成免疫功能和進行免疫調(diào)節(jié)的重要活性物質(zhì)。生物活性肽指能夠調(diào)節(jié)生物機體的生命活動或具有某些

2、生理活性作用的一類肽的總稱，大多以非活性狀態(tài)存在于蛋白質(zhì)長鏈中，當被酶解成適當?shù)拈L度時，它們的生理活性才會表現(xiàn)出來。 蠶蛹(silkworm pupa)是家蠶(Antherea pernyi Guerin-Meneville)生命周期的一個階段，蠶蛹蛋白與蠶蛹肽含有60％以上的人體必須氨基酸，還富含多種營養(yǎng)素，具有補充機體營養(yǎng)、促進生長發(fā)育、抗疲勞、抗衰老、提高人體免疫力等多種功能。本文主要對超臨界CO<,2>萃取技術(shù)提取蠶蛹油

3、制備蠶蛹蛋白粉的最佳工藝條件進行了研究，以得到的蠶蛹蛋白粉為原料進行蠶蛹蛋白肽的最佳酶解條件研究，并對蠶蛹蛋白肽進行分離純化、分子量測定及功能活性研究。 首先進行蠶蛹蛋白粉的制備，采用超臨界CO<,2>萃取技術(shù)對蠶蛹進行脫脂處理，以蠶蛹油提取率為指標，采用三因素三水平正交試驗設(shè)計確定超臨界CO<,2>萃取蠶蛹油的最佳工藝條件為：萃取溫度45℃，壓力25MPa，時間180min。蠶蛹油提取率為95.99％。 蠶蛹蛋白肽的水

4、解過程中，首先進行酶的篩選，在各自的最適條件下進行酶解，以水解度(DH)為指標，確定了最佳酶制劑為2709堿性蛋白酶。試驗考察了pH值、時間、溫度、固液比、加酶量對水解蠶蛹蛋白肽的影響，在單因素試驗的基礎(chǔ)上，采用L<,16>(4<'5>)正交試驗確定了蠶蛹蛋白肽的最佳酶解工藝條件為：溫度為55℃，時間為2.5h，固液比為1:7，pH值為8，酶與底物比為7％。蠶蛹蛋白肽的水解度為29.97％。 由于在酶解過程中，為了保持其在最適p

5、H值范圍內(nèi)，需加入酸、堿，產(chǎn)生了大量的鹽，而且得到的蠶蛹蛋白肽顏色較深，蠶蛹蛋白肽需精制處理。通過添加3％活性碳進行脫色、脫苦，可獲得色清、味好的蠶蛹蛋白肽。通過陰陽離子交換樹脂可除去91.20％的鹽分。 試驗對精制后的蠶蛹蛋白肽理化性質(zhì)和功能活性進行了研究，通過凝膠過濾層析技術(shù)得到蠶蛹蛋白水解液的洗脫曲線為一單一對稱峰，說明水解液的多肽純度較高、是由分子量接近的多肽組成的。通過SDS-PAGE電泳法檢測分子量分布，發(fā)現(xiàn)蠶蛹肽分