mPEG-CS介導(dǎo)的livin和survivin雙基因干擾治療大腸癌動物實驗研究.pdf

1、目的：探討mPEG-CS納米載體介導(dǎo)的針對livin基因和survivin基因的特異性RNA干擾治療大腸癌動物實驗研究，比較雙基因干擾與單基因干擾對荷瘤裸鼠生長的影響。
　　 方法：通過大腸癌癌細胞懸液皮下注射成瘤的方法構(gòu)建大腸癌裸鼠模型；免疫組化試驗確定livin、survivin的亞細胞定位；mPEG-CS介導(dǎo)的livin和survivin雙基因干擾之后后觀察觀察瘤體體積變化情況，并計算抑瘤率，切片后行HE染色觀察瘤體細胞形

2、態(tài)，免疫組化SP法分析基因干擾后livin和survivin蛋白的表達，TUNEL凋亡染色觀察腫瘤細胞凋亡情況。
　　 結(jié)果：大腸癌癌細胞懸液法皮下注射成瘤的方法構(gòu)建大腸癌裸鼠模型2周后肉眼下可見瘤體形成，并生長迅速，約5周后瘤體基本穩(wěn)定在一個平臺上，瘤體切片后行HE染色符合大腸癌株細胞；免疫組化染色后在電子顯微鏡下觀察結(jié)果表明Survivin的陽性率為81％，亞細胞定位主要位于腫瘤細胞胞漿(48.5％)，細胞核(49.2％)和

3、胞膜(2.3％)也有輕度染色。livin的陽性率為76.9％，其中強陽性率為33.2％，中度陽性率為27.7％，弱陽性率為15.0％。亞細胞定位主要位于腫瘤細胞胞漿(49.6％)與細胞核(50.4％)，其中胞漿與胞核表達率無明顯差異mPEG-CS納米載體介導(dǎo)針對livin基因和survivin基因的特異性RNA干擾治療后結(jié)果表明，livin和survivin雙基因干擾可以明顯抑制瘤體生長，瘤重及體積均明顯均明顯小于單基因干擾。免疫組化S

4、P法結(jié)果發(fā)現(xiàn)，livin和survivin雙基因干擾后livin蛋白表達抑制率為78.6％，survivin蛋白表達抑制率為73.3％，其作用均強于單基因干擾。TUNEL凋亡染色結(jié)果表明，livin和survivin雙基因干擾誘導(dǎo)細胞凋亡能力比單獨livin或者survivin基因干擾強。
　　 結(jié)論：大腸癌癌細胞懸液法皮下注射成瘤的方法構(gòu)建大腸癌裸鼠模型是可行的，在病因?qū)W上更接近癌的自然發(fā)生過程，且成瘤率高，適宜于大腸癌病因及