IFN-γ基因治療大腸癌的實驗研究.pdf

1、南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文IFNγ基因治療大腸癌的實驗研究姓名：丁強申請學(xué)位級別：碩士專業(yè)：外科學(xué)指導(dǎo)教師：吳文溪2002.4.18南京醫(yī)科大學(xué)碩士學(xué)位論文長旺盛的LOVO、SW620、HCTll6BG細胞內(nèi)并利用用PCR、RT—PCR對IFN—Y基因的整合和表達進行鑒定，結(jié)果表明IFNY基因已成功的進入腫瘤細胞內(nèi)并實現(xiàn)表達。利用雙抗體夾心ELISA法測定基因轉(zhuǎn)染后不同時間細胞培養(yǎng)上清中IFN—Y的活性。結(jié)果顯示基因轉(zhuǎn)染后4小時細胞上清內(nèi)

2、即可檢測到IFNY活性，24小時達到最大值，其活性持續(xù)6天仍未見明顯下降不同的細胞株所分泌的IF彬y的量不同，顯示了細胞株之間生物學(xué)特性的差異。，二、IFNY基因轉(zhuǎn)染對腫瘤細胞的作用主要是通過細胞學(xué)實驗檢測IFNY基因轉(zhuǎn)染后細胞表面抗原的表達情況、對細胞的生長抑制、細胞周期的影響情況，初步探討IFN—y基因轉(zhuǎn)染后抗腫瘤作用的機制。6手1用放射免疫法檢測基因轉(zhuǎn)染前后細胞分泌CEA的變化，分別收集基因轉(zhuǎn)染后48小時的細胞培養(yǎng)上清，利用相同培

3、養(yǎng)條件下未進行基因轉(zhuǎn)染的細胞培養(yǎng)上清作對照，結(jié)果顯示：經(jīng)基因轉(zhuǎn)染后，原來高表達CEA的細胞株(LOVO、HCTll6BG)其上清中CEA含量增加明顯(p005)利用流式細胞儀對相同培養(yǎng)條件下基因轉(zhuǎn)染前后細胞表面HLADR的表達情況檢測結(jié)果可以看出：導(dǎo)入IFNv基因后，各細胞株表面的H換DR的表達量明顯增強(p001)。通過對IFNY基因轉(zhuǎn)染前后腫瘤細胞的凋亡情況和細胞周期的變化顯示：轉(zhuǎn)染IFNY基因后促進了LOVO細胞的凋亡(p005)