神經(jīng)再生素促海馬神經(jīng)元生長(zhǎng)作用及機(jī)制初探.pdf

1、目的：觀察神經(jīng)再生素(NerveRegenerationFactor，NRF)對(duì)體外培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元生長(zhǎng)的促進(jìn)作用，初步探討NRF促神經(jīng)生長(zhǎng)的作用機(jī)制。 方法： 1、以體外原代培養(yǎng)的胎鼠海馬神經(jīng)元為研究模型，通過相差顯微鏡采用Scion軟件，測(cè)量不同濃度NRF(0.25，0.5，1.Oμg/m1)作用不同時(shí)間(6h，12h，24h)對(duì)海馬神經(jīng)元神經(jīng)突起生長(zhǎng)的影響。 2、胎鼠海馬神經(jīng)元加藥6h后，分別提取對(duì)照組(

2、DMEM基礎(chǔ)培養(yǎng)基)和加藥組(1.0p.g/mlNRF)細(xì)胞總RNA，經(jīng)逆轉(zhuǎn)錄生成生物素標(biāo)記的cRNA，純化和片段化處理后與GeneChip~RatGenome2302.0Array芯片(Affymetrix公司)雜交，洗脫后芯片掃描，數(shù)據(jù)處理，觀察NRF對(duì)海馬神經(jīng)元基因表達(dá)的影響。 3、通過實(shí)時(shí)熒光定量PCR觀察NRF不同濃度(0.25，0.5，1.01ag/m1)及不同作用時(shí)間(6h，12h，24h)對(duì)海馬神經(jīng)元生長(zhǎng)相關(guān)蛋白

3、.43(GrowthassociatedProtein-43)基因表達(dá)的影響；以goatanti.GAP-43polyclonalantibody為一抗，donkeyanti-goatIgG為二抗，采用免疫熒光細(xì)胞化學(xué)法和Westernblot觀察，不同濃度NRF(0.25，0.5，1.Ogg/m1)加藥24h后，對(duì)海馬神經(jīng)元GAP-43表達(dá)的影響。 結(jié)果： 1、Scion軟件測(cè)量和統(tǒng)計(jì)結(jié)果顯示，NRF具有促進(jìn)體外培養(yǎng)的

4、胎鼠海馬神經(jīng)元突起生長(zhǎng)的作用，在所觀察的劑量范圍內(nèi)，隨著藥物濃度的增加，作用逐步增強(qiáng)，至1μg/ml達(dá)峰值，隨著加藥時(shí)間的延長(zhǎng)，作用逐步增加，至24h時(shí)，作用最明顯。 2、Aflymetrix大鼠全基因組芯片分析結(jié)果表明，檢測(cè)的15866個(gè)基因中，248個(gè)基因上調(diào)，316個(gè)基因下調(diào)，其中25個(gè)上調(diào)和47個(gè)下調(diào)基因有顯著性差異表達(dá)。這些差異表達(dá)的基因，有G蛋白偶聯(lián)受體、信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)分子、細(xì)胞組分、生物過程生長(zhǎng)代謝調(diào)控因子、免疫蛋白、酶

5、和凋亡的調(diào)控因子等。 3、實(shí)時(shí)熒光定量PCR結(jié)果提示，NRF能使體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元GAP-43基因表達(dá)上調(diào)，1txg/mlNRF加藥后6h開始與陰性對(duì)照組差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義；免疫熒光細(xì)胞化學(xué)和Westernblot結(jié)果提示，NRF能使體外培養(yǎng)的海馬神經(jīng)元GAP-43蛋白表達(dá)上調(diào)，NRF濃度為1.01xg/ml時(shí)作用最強(qiáng)。 結(jié)論 1、NRF具有促進(jìn)體外培養(yǎng)大鼠海馬神經(jīng)元神經(jīng)突起生長(zhǎng)的作用，且這種作用呈現(xiàn)劑量相關(guān)和時(shí)