膠質(zhì)細(xì)胞代謝抑制劑氟代檸檬酸對甲醛炎性痛大鼠脊髓后角神經(jīng)元型和誘導(dǎo)型一氧化氮合酶表達(dá)的影響.pdf

1、目的：N0(nitric oxide，NO)在外周、脊髓、脊髓以上的3個(gè)不同水平參與痛過程。在脊髓損傷、鞘內(nèi)注射酵母多糖等疼痛模型中NOS表達(dá)均增高，說明NO在脊髓水平參與了痛覺的產(chǎn)生。側(cè)腦室微量注射NO供體對大鼠痛行為具有易化作用，側(cè)腦室微量注射L-NAME對小鼠有明顯的鎮(zhèn)痛效應(yīng)，這說明NO在腦水平參與痛過程。 傳統(tǒng)的觀點(diǎn)認(rèn)為神經(jīng)膠質(zhì)細(xì)胞僅是對神經(jīng)元起著支持和營養(yǎng)的作用，而不具有細(xì)胞之間的信號(hào)傳遞功能，痛覺傳入信號(hào)只能引起脊

2、髓神經(jīng)元的興奮性改變，因而認(rèn)為疼痛在脊髓水平的調(diào)制和整和只與脊髓神經(jīng)元及其遞質(zhì)有關(guān)。然而用完全由神經(jīng)元參與的模型卻無法解釋一些疼痛現(xiàn)象。體外實(shí)驗(yàn)表明，膠質(zhì)細(xì)胞還可以被一些疼痛相關(guān)物質(zhì)激活。膠質(zhì)細(xì)胞激活后釋放大量神經(jīng)活性物質(zhì)和細(xì)胞因子。這些從膠質(zhì)細(xì)胞釋放的神經(jīng)活性物質(zhì)和促炎性細(xì)胞因子作用于脊髓的痛覺傳遞神經(jīng)元，使其處于超敏化狀態(tài)。我室既往研究發(fā)現(xiàn)膠質(zhì)細(xì)胞代謝抑制劑氟代檸檬酸(nuorocitrate，F(xiàn)C)可抑制甲醛炎性痛大鼠脊髓后角NA

3、DPH-d陽性表達(dá)，提示膠質(zhì)細(xì)胞參與甲醛炎性痛時(shí)脊髓后角NOS表達(dá)的上調(diào)。但FC抑制了何種類型的NOS表達(dá)上調(diào)?膠質(zhì)細(xì)胞表達(dá)何種類型的NOS等問題尚有待于闡明。 因此，本研究觀察FC對甲醛炎性痛大鼠脊髓后角nNOS和iNOS表達(dá)的影響，進(jìn)一步確定膠質(zhì)細(xì)胞在甲醛炎性痛時(shí)NOS表達(dá)上調(diào)中的作用。 方法：健康雄性Sprague-Dawley大鼠35只，體重260～280g，隨機(jī)分為以下7組： 1 對照組：不加任何處理，

4、直接測定機(jī)械縮足痛閾和熱縮足潛伏期后，取材。 2 甲醛1h組：大鼠足底注射甲醛，觀察1h內(nèi)的自發(fā)縮足次數(shù)后取材。 3 甲醛1h+NS組：大鼠足底注射甲醛后10 min，鞘內(nèi)注射1 μl NS作為對照，在注射甲醛后1 h，取材。 4 甲醛lh+FC組：大鼠足底注射甲醛后10 min，鞘內(nèi)注射1 μl FC，在注射甲醛后1 h取材。 5 甲醛24h組：大鼠足底注射甲醛后24 h，測定機(jī)械縮足痛閾和熱縮

5、足潛伏期后取材。 6 甲醛24h+NS組：大鼠足底注射甲醛后10 min，鞘內(nèi)注射1 μl NS作為對照，其它同甲醛24h組。 7 甲醛24h+FC組：大鼠足底注射甲醛后10 min，鞘內(nèi)注射1 μl FC(1 nmol/μ1)，其它同甲醛24h組。 上述各組動(dòng)物在完成上述實(shí)驗(yàn)程序后，免疫組化觀察腰5(L5)脊髓后角nNOS和iNOS表達(dá)的變化。 結(jié)果： 1 自發(fā)縮足次數(shù)甲醛1h組注射甲醛后

6、第1相自發(fā)縮足次數(shù)(29±12)次，第2相自發(fā)縮足次數(shù)(180±40)次。 2 機(jī)械縮足痛閾值和熱縮足潛伏期與對照組比較，足底注射甲醛后24 h甲醛注射部位的機(jī)械縮足痛閾和熱縮足潛伏期升高，而注射甲醛對側(cè)相應(yīng)部位機(jī)械縮足痛閾和熱縮足潛伏期降低，鞘內(nèi)注射FC對注射部位這種變化無影響，但是抑制了注射對側(cè)的降低。 3 nNoS的表達(dá) L<,5>脊髓后角nNOS免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞體積較小，多呈圓形、橢圓形、菱形，集中分布在Ⅰ-

7、Ⅱ板層。與對照組比較，足底注射甲醛后1 h和24 h兩側(cè)nNOS免疫反應(yīng)細(xì)胞數(shù)量及染色深度顯著增加，尤其是注射側(cè)。鞘內(nèi)注射FC則使這種增加受到降低了注射甲醛誘導(dǎo)的兩側(cè)nNOS陽性細(xì)胞數(shù)量及染色深度的增加。 4 iNoS的表達(dá) L<,5>脊髓后角iNOS免疫反應(yīng)陽性細(xì)胞多呈菱形、圓形、橢圓形。注射甲醛后1 h和24 h兩側(cè)iNOS免疫反應(yīng)細(xì)胞數(shù)量及染色深度均增加，尤其是注射側(cè)，這種增加可被鞘內(nèi)注射FC抑制。 結(jié)論：鞘內(nèi)