誘導(dǎo)型一氧化氮合酶耳蝸表達(dá)的定位與定量研究.pdf

1、第一部分畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射對SD大鼠藥物性聾的監(jiān)測 目的探討畸變產(chǎn)物耳聲發(fā)射(DPOAEs)在新霉素藥物性聾早期診斷中的意義，并觀察一氧化氮合酶拮抗劑N一甲基一L一精氨酸(L—NAME)對藥物性聽力損害的保護(hù)作用。方法30只SD大鼠隨機(jī)分成三組：實(shí)驗(yàn)組、拮抗劑組和對照組。實(shí)驗(yàn)組連續(xù)肌肉注射新霉素150mg／kg／d，共14天；拮抗劑組動(dòng)物腹腔注射L—NAME50mg／kg／d，30分鐘后肌肉注射新霉素同實(shí)驗(yàn)組，對照組注射生理鹽水O

2、．5ml，分別于給藥后4、7、n、15天測試DPOAEs。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組用藥后7天輸入／輸出(I／0)曲線斜率發(fā)生變化且幅度降低，高頻DPOAEs幅值降低，差別具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P<0．01；給藥后15天I／O曲線及DPOAES基本引不出。拮抗劑組給藥后¨天出現(xiàn)I／0曲線斜率和DPOAEs幅值降低具有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，給藥后15天工／0曲線和DPOAEs仍能引出。對照組I／0曲線及DPOAEs幅值沒有明顯變化。結(jié)論DPOAEs能夠發(fā)現(xiàn)藥物性聾早期的

3、聽力學(xué)改變，且無創(chuàng)、簡便易行，可作為臨床用藥的聽力監(jiān)測。L—NAME可以減輕新霉素的耳毒性。 第二部分SD大鼠藥物性聾耳蝸病變的形態(tài)學(xué)觀察 目的觀察新霉素致藥物性聾耳蝸超微結(jié)構(gòu)的變化。方法給藥14天后，每組大鼠各取兩只行掃描和透射電鏡觀察毛細(xì)胞、螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、蝸神經(jīng)和血管紋的病變。結(jié)果實(shí)驗(yàn)組底圈外毛細(xì)胞靜纖毛脫落，柱狀細(xì)胞腫脹，呈指狀外突，新生的異型細(xì)胞填補(bǔ)缺損，中圈及頂圈纖毛紊亂、倒伏、融合；透射電鏡見外毛細(xì)胞、螺旋

4、神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、血管紋內(nèi)皮細(xì)胞壞死，支持細(xì)胞器腫脹，線粒體空泡化，蝸神經(jīng)板層結(jié)構(gòu)松散，粒體空泡化，鞘內(nèi)結(jié)構(gòu)不易辨認(rèn)。底圈毛細(xì)胞損傷嚴(yán)重區(qū)域有小膠質(zhì)樣細(xì)胞產(chǎn)生。拮抗劑組超微結(jié)構(gòu)改變與實(shí)驗(yàn)組相似但輕微，未見壞死和小膠質(zhì)樣細(xì)胞。內(nèi)毛細(xì)胞的病變輕微。對照組耳蝸超微結(jié)構(gòu)沒有變化。結(jié)論耳蝸諸結(jié)構(gòu)中外毛細(xì)胞對新霉素最敏感，敏感性第一排高于第二排、高于第三排，損傷規(guī)律從底圈到頂圈，從外毛細(xì)胞到螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、血管紋內(nèi)皮細(xì)胞、蝸神經(jīng)、支持細(xì)胞，內(nèi)毛細(xì)胞相對不

5、易受損；L—NAME可以減輕新霉素對耳蝸結(jié)構(gòu)的損傷；新霉素?fù)p傷后耳蝸小膠質(zhì)樣細(xì)胞的來源及作用值得進(jìn)一步研究。 第三部分誘導(dǎo)型一氧化氮合酶耳蝸表達(dá)的定位與定量研究 目的觀察誘導(dǎo)型一氧化氮合酶(iNOS)在新霉素誘導(dǎo)下耳蝸表達(dá)分布的部位，并對耳蝸不同周圈iNOS的表達(dá)進(jìn)行定量分析。方法用免疫組織化學(xué)的方法檢測iNOS在耳蝸的表達(dá)分布部位，運(yùn)用IPP圖像分析軟件，以陽性單位為指標(biāo)行定量分析。結(jié)果對照組耳蝸沒有iNOS顯色；實(shí)驗(yàn)

6、組螺旋神經(jīng)節(jié)細(xì)胞、Deiters’細(xì)胞、柱細(xì)胞和Hensens細(xì)胞iNOS染色強(qiáng)陽性，血管紋染色陽性，上訴各表達(dá)部位陽性單位均值從底圈到頂圈依次為螺旋神經(jīng)節(jié)40．14±2．57．29·45±2·10，23．89±2．53；Corti器27．83±2．36，22．00±2．39，15．44±2·68；血管紋18．76±2．33，13．94±2．02，10．86±1．53，各圈PU值差別具有高度統(tǒng)計(jì)學(xué)意義，P