大鼠甲醛炎性痛過程中脊髓后角誘導(dǎo)型一氧化氮合酶陽性細(xì)胞的構(gòu)成.pdf

1、目的 一氧化氮(nitric oxide，NO)是調(diào)節(jié)疼痛的重要介質(zhì)，NO合酶(NO synthase，NOS)是生成NO的限速酶。已有證據(jù)表明，外周傷害性刺激可誘導(dǎo)脊髓NOS表達(dá)增多，產(chǎn)生大量NO參與疼痛的產(chǎn)生與維持。我室既往應(yīng)用免疫組化和NADPH-d等方法研究表明，甲醛炎性痛時(shí)，脊髓后角nNOS和iNOS表達(dá)增多，進(jìn)一步證實(shí)了NO在外周炎性痛和痛過敏的產(chǎn)生和維持中的作用。但是，這些NOS陽性細(xì)胞的細(xì)胞構(gòu)成尚不清楚。

2、 越來越多的證據(jù)表明，脊髓膠質(zhì)細(xì)胞的激活與病理性痛和痛覺過敏的產(chǎn)生和維持有密切關(guān)系。例如，可逆性膠質(zhì)細(xì)胞代謝抑制劑可以抑制許多疼痛模型中的自發(fā)痛和痛覺過敏的產(chǎn)生和維持。在許多類型的神經(jīng)病理性痛，如脊神經(jīng)損傷(冷凍，結(jié)扎)、坐骨神經(jīng)結(jié)扎等神經(jīng)病理性痛，以及甲醛、酵母多糖等引起的炎性痛過程中，均可見脊髓星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞增殖活化。這些增殖活化的膠質(zhì)細(xì)胞可釋放多種化學(xué)物質(zhì)和細(xì)胞因子促進(jìn)痛和痛覺過敏的產(chǎn)生和維持。由此可見，除神經(jīng)元以外，

3、脊髓膠質(zhì)細(xì)胞可能也參與甲醛炎性痛時(shí)脊髓NOS表達(dá)的上調(diào)。 因此，本實(shí)驗(yàn)采用免疫組織化學(xué)雙重標(biāo)記GFAP(星形膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)記蛋白)和iNOS、以及連續(xù)切片免疫組化對比觀察OX42(小膠質(zhì)細(xì)胞特異性標(biāo)記蛋白)和iNOS的表達(dá)等方法，觀察大鼠足底注射甲醛引起的急性炎性痛過程中，脊髓后角星形膠質(zhì)細(xì)胞和小膠質(zhì)細(xì)胞在脊髓iNOS表達(dá)增多中的作用，以期進(jìn)一步闡明脊髓膠質(zhì)細(xì)胞和NO在外周炎癥性痛和痛過敏中的作用。 方法： 將

4、30只雄性Sprague．Dawley大鼠隨機(jī)分為生理鹽水組和甲醛組，分別足底注射生理鹽水和甲醛，每組按足底注射后取材時(shí)間的不同又分為1 h、24 h和48 h組(n=51。各組于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)斷頭取腰5脊髓節(jié)段(L5)，石蠟切片上行iNOS/GFAP免疫組化雙重染色。 另取30只大鼠隨機(jī)分為生理鹽水組和甲醛組，每組按足底注射后取材時(shí)間的不同分為1 h、1 d、3 d、7 d和14 d組。各組于相應(yīng)時(shí)間點(diǎn)灌注取材，冰凍連續(xù)切片，免

5、疫組化對比觀察L5脊髓后角OX42和iNOS的表達(dá)。 對以上各組動(dòng)物均于取材前行相應(yīng)的行為學(xué)觀測：1 h組動(dòng)物于取材前行痛反應(yīng)評分；其他組動(dòng)物于取材前測定熱輻射縮足反射潛伏期和機(jī)械縮足反射閾值。 結(jié)果： 大鼠右后足底注射5％甲醛后，注射足出現(xiàn)典型的雙向性自發(fā)縮足反應(yīng)，持續(xù)1 h以上。注射部位熱輻射縮足潛伏期延長和機(jī)械刺激縮足反射閾值升高，而非注射足相應(yīng)部位的熱輻射縮足潛伏期縮短和機(jī)械刺激縮足反射閾值降低。注射

6、后甲醛后1 h，24 h和48 h，在注射足同側(cè)的L5脊髓后角和中央管周圍均可觀察到少量iNOS/GFAP雙標(biāo)細(xì)胞散在分布，各時(shí)間點(diǎn)之間無顯著差異。 連續(xù)切片免疫組化對比觀察發(fā)現(xiàn)，足底注射甲醛后，L5脊髓后角iNOS與OX42陽性細(xì)胞從形態(tài)、分布、表達(dá)時(shí)相上均有顯著差異，并未呈現(xiàn)明顯一致的趨勢，iNOS與OX42的表達(dá)沒有顯著的相關(guān)性。 結(jié)論： 大鼠足底注射甲醛后，注射部位對熱和機(jī)械刺激感覺減退，而非注射足相應(yīng)