肝靶向氟尿苷二乙酸酯固體脂質(zhì)納米粒的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、本文研究目的：合成氟尿苷二乙酸酯(FUDRA)和不同聚合度的聚乙二醇十八烷基醚半乳糖苷(GnDE)，制備氟尿苷二乙酸酯固體脂質(zhì)納米粒(FUDRA-SLN)和GnDE修飾的氟尿苷二乙酸酯固體脂質(zhì)納米粒(FUDRA-GnSLN)。建立生物樣品中氟尿苷(FUDR)的高效液相色譜(HPLC)檢測(cè)方法；考察FUDR、FUDRA-SLN及FUDRA-GnSLN在小鼠體內(nèi)的分布，探討其肝靶向作用的區(qū)別，為尋找理想的治療肝癌的氟尿苷新制劑奠定基礎(chǔ)。

2、 研究方法： 1.在吡啶和4-N'N'-二甲氨基吡啶(DMAP)的催化下，F(xiàn)UDR和乙酸酐作用生成氟尿苷二乙酸酯(FUDRA)；不同聚合度的聚乙二醇十八烷基醚(PnSE)C18H37(OCH2CH2)nOH(n=2,10)經(jīng)半乳糖苷化、脫乙酰基兩步反應(yīng)制備相應(yīng)的半乳糖苷GnDE(n=2，10)。1HNMR鑒定FUDRA和GnDE的結(jié)構(gòu)。 2.精密吸取FUDRA溶液，分別加入在37℃水浴中預(yù)熱的不同pH值的磷酸鹽緩沖液

3、(PBS)、血清及肝、腎、肺勻漿稀釋液中，于不同時(shí)間點(diǎn)取樣，RP-HPLC法測(cè)定殘留FUDRA濃度。 3.精密量取FUDRA的正辛醇溶液(84μg·mL-1)5.00mL，加入用正辛醇飽和過(guò)的PBS(pH6.8)5.00mL，混合5min，RP-HPLC法測(cè)定兩相中FUDRA濃度，計(jì)算FUDRA分配系數(shù)。同法測(cè)定FUDR的分配系數(shù)。 4.采用薄膜超聲分散法制備FUDRA-SLN和FUDRA-GnSLN。制備工藝：精密稱取

4、處方量物質(zhì)于250mL圓底燒瓶中，加入15mL氯仿溶解。旋轉(zhuǎn)蒸發(fā)除去氯仿，在燒瓶壁上形成一層薄膜。加入60mg·mL-1甘露醇水溶液10mL，水浴超聲兩次，0.45μm微孔濾膜過(guò)濾，分裝于西林瓶中。RP-HPLC法測(cè)定載藥量和包封率。通過(guò)正交設(shè)計(jì)優(yōu)化處方。 5.建立測(cè)定FUDR生物樣品濃度的RP-HPLC法，取0.1mL血清或臟器勻漿，加入0.5mL甲醇，漩渦混合1min，離心10min，上清液直接進(jìn)樣。選用KromasilC1

5、8柱(150mm×4.6mm，5μm)為分析柱，pH7.4PBS-甲醇(95∶5v/v)為流動(dòng)相，流速為1mL·min-1，檢測(cè)波長(zhǎng)為268nm。 6.將FUDR-sol、FUDRA-SLN、FUDRA-G2SLN和FUDRA-G10SLN按18.6mg·kg-1(FUDRA-SLN和FUDRA-GnSLN按FUDR劑量折算)分別給小鼠尾靜脈注射，于給藥后不同時(shí)間點(diǎn)檢測(cè)FUDR在血清、肝、腎和肺中的濃度，考察以上四種藥物在小鼠體

6、內(nèi)的分布及肝靶向性。 研究結(jié)果： 1.1HNMR譜表明FUDRA和GnDE結(jié)構(gòu)正確。 2.FUDRA在不同pH值PBS中水解為表觀一級(jí)反應(yīng)。pH值對(duì)FUDRA穩(wěn)定性影響較大，F(xiàn)UDRA在弱酸性溶液中較穩(wěn)定，在弱堿性溶液中水解較快。血清和臟器勻漿中的酶可顯著加速前藥的水解，在肝勻漿中水解最快。 3.FUDR與乙酸酐反應(yīng)生成FUDRA后，分配系數(shù)由0.24增大到58.13，脂溶性明顯提高。 4.優(yōu)化的

7、FUDRA-SLN處方為：FUDRA10mg、大豆磷脂80mg。優(yōu)化的FUDRA-GnSLN處方為：FUDRA10mg、大豆磷脂80mg、GnDE4mg。FUDRA-SLN的包封率為98.27％，載藥量為8.20％(n=3);FUDRA-G2SLN的包封率為95.12％，載藥量為8.37％(n=3);FUDRA-G10SLN的包封率為94.36％，載藥量為8.91％(n=3)。三者載藥量和包封率無(wú)明顯差別。FUDRA-SLN為略帶淡藍(lán)色

8、的膠體，F(xiàn)UDRA-GnSLN為乳白色的膠體。電鏡下可見許多圓形或橢圓形的球粒。FUDRA-SLN的粒徑為215.3±83.1nm，F(xiàn)UDRA-G2SLN的粒徑為91.3±21.2nm，F(xiàn)UDRA-G10SLN的粒徑為106.0±37.7nm。經(jīng)GnDE修飾的SLN粒徑明顯小于未經(jīng)修飾的SLN。 5.檢測(cè)FUDR在生物樣品中濃度的各工作曲線線性范圍為15.0～360.0μg·mL-1，最低檢測(cè)濃度為3.0μg·mL-1(S/N=

9、3)。各樣品平均提取回收率＞95％，方法回收率在91～112％之間，日內(nèi)日間精密度的RSD均小于10％。此方法簡(jiǎn)單、快速、靈敏，可用于小鼠體內(nèi)分布研究。6.FUDR-sol、FUDRA-SLN、FUDRA-G2SLN和FUDRA-G10SLN的肝靶向效率分別為1.71、5.62、11.25和11.43。 研究結(jié)論：本研究制備了氟尿苷二乙酸酯(FUDRA)，首次合成了不同聚合度的聚乙二醇十八烷基醚半乳糖苷(GnDE)，在此基礎(chǔ)上制

10、備了FUDRA-SLN和FUDRA-GnSLN；考察了FUDRA在不同pH條件下以及生物樣品中的穩(wěn)定性，表明FUDRA在弱酸性條件下較穩(wěn)定，在血清和臟器勻漿中水解較快，在肝勻漿中水解最快；通過(guò)正交設(shè)計(jì)優(yōu)化了納米粒的處方和制備工藝，按優(yōu)化處方制各的FUDRA-SLN和FUDRA-GnSLN有較高的載藥量和包封率；建立了測(cè)定生物樣品中FUDR濃度的RP-HPLC法；進(jìn)行了FUDR-sol、FUDRA-SLN和FUDRA-GnSLN在小鼠體內(nèi)