云南傣族原發(fā)性高血壓易感基因的初步研究.pdf

1、原發(fā)性高血壓是一種嚴重危害人類健康的心血管系統(tǒng)疾病。近35年來高血壓在云南傣族中的患病率顯著上升，探索云南傣族中原發(fā)性高血壓的易感基因以及等位基因之間的相互作用，有助于揭示傣族原發(fā)性高血壓的發(fā)病機制、進一步闡明環(huán)境選擇因素、遺傳因素和疾病三者的相互作用和關(guān)系。
　　由于原發(fā)性高血壓高度的遺傳異質(zhì)性，原發(fā)性高血壓的關(guān)聯(lián)基因在不同群體中會有所不同。其他人群中已報道的候選基因在傣族群體中與高血壓的關(guān)系還不清楚。對這些基因進行研究有助于我

2、們找出傣族原發(fā)性高血壓的相關(guān)致病基因，揭示發(fā)病機制。鈉離子作為重要的環(huán)境因素與高血壓的發(fā)生發(fā)展密切相關(guān)。根據(jù)對傣族飲食習慣的了解，對傣族的鈉離子敏感候選基因進行研究，是探索傣族近35年來高血壓患病率明顯增高的分子機制的切入點。
　　原發(fā)性高血壓是多基因遺傳疾病，其遺傳機制依賴于多個微效基因的共同作用，基因間存在的上位效應將對高血壓發(fā)病產(chǎn)生影響，但目前此類研究還較少。分析兩個候選基因的上位效應可以為高血壓易感基因研究提供更多的線索。

3、根據(jù)高血壓調(diào)節(jié)的生物學過程，本研究選擇腎素-血管緊張素-醛固酮系統(tǒng)中的基因及與該代謝途徑相關(guān)的基因進行關(guān)聯(lián)分析及基因位點的上位效應分析。
　　本研究首先對運用DNA池焦磷酸測序法初步篩選候選位點進行方法學研究，然后基于DNA池焦磷酸測序法初步篩選的候選位點，選取云南傣族425例正常對照樣本及412例原發(fā)性高血壓患者樣本，采用SNaPshot單堿基延伸測序法、Taqman探針法、PCR-長度多態(tài)法和基因測序這幾種基因分型方法對ADD

4、1、ACE和CYP11B2三個基因的7個熱點多態(tài)性位點(ADD1_ rs4963、ADD1_ rs4961、ADD1_ rs12503220、ACE_rs4291、ACE_rs4343、ACE_I/D、CYP11B2_ rs1799998)進行逐一個體基因分型，再進一步研究ACE和ADD1這兩個候選基因與高血壓的關(guān)系及多態(tài)性位點之間可能存在的上位效應作用。
　　利用已知頻率位點建立優(yōu)化DNA池焦磷酸測序法并進行高通量基因分型，對所

5、得結(jié)果進行統(tǒng)計分析和關(guān)聯(lián)分析，結(jié)果顯示，DNA池焦磷酸測序法可初步測定群體中高頻率及非復雜性的SNPs等位基因頻率，與SNaPshot法逐一分型所得頻率誤差在0.9％-2.3％之間，DNA池焦磷酸測序法對等位基因頻率估計較為準確。在傣族群體中，我們所選擇的7個高血壓候選位點經(jīng)過x2檢驗并進行Bonferroni統(tǒng)計學校正后，沒有發(fā)現(xiàn)傣族高血壓關(guān)聯(lián)位點。進行上位效應分析結(jié)果顯示，單個位點多態(tài)性與高血壓相關(guān)性不明顯，但將功能相關(guān)基因進行上位

6、效應分析后，與高血壓相關(guān)性顯著增強。ACE基因缺失(D)與ADD1基因的G等位基因聯(lián)合出現(xiàn)時，高血壓患病風險顯著增加(p=0.0014，OR=1.567，95％CI:1.189-2.067);ACE基因缺失(D)與CYP11B2基因的T等位基因聯(lián)合出現(xiàn)時，高血壓風險顯著增加（p=1.58E-08，OR=2.320，95％CI:1.728-3.116）。即在顯性-顯性模式下ACE-D/ADD1-G和ACE-D/CYP11B2-T上位效應均

7、為傣族原發(fā)性高血壓風險因素。Logist回歸分析的研究結(jié)果顯示年齡、BMI、總膽固醇、飲酒等因素也與高血壓發(fā)病相關(guān)聯(lián)。排除這些影響因素作用后，本研究中的上位效應仍與高血壓關(guān)聯(lián)顯著。綜上，本研究首先進行了方法學方面的研究，結(jié)果顯示，DNA池焦磷酸測序法適用于中頻和高頻的非復雜性SNPs關(guān)聯(lián)分析，運用該方法篩選候選基因，可快速得到混合樣本等位基因頻率;本研究的7個候選位點:ADD1_ rs4963、ADD1_ rs4961、ADD1_rs1

8、2503220、ACE_ rs4291、ACE_ rs4343、ACE_ I/D、CYP11B2 rs1799998與傣族原發(fā)性高血壓沒有顯著關(guān)聯(lián)性，但ACE-D與ADD1-G及ACE-D與CYP11B2-T間存在上位效應，并且二者的上位效應均與傣族原發(fā)性高血壓有顯著關(guān)聯(lián)性;另外，環(huán)境因素如BMI，總膽固醇，飲酒等也與傣族原發(fā)性高血壓有顯著關(guān)聯(lián)性。
　　本研究顯示，高血壓關(guān)聯(lián)基因有群體差異，不同人群地區(qū)高血壓發(fā)病機制有所不同。在易