急性白血病線粒體DNA D-LOOP區(qū)突變的研究.pdf

1、研究目的 線粒體(mitochondria)是高等動(dòng)物細(xì)胞內(nèi)除細(xì)胞核外唯一含有DNA的細(xì)胞器,且能不依賴核基因組進(jìn)行復(fù)制、轉(zhuǎn)錄和翻譯,是進(jìn)行氧化磷酸化反應(yīng)(oxidative phosphorylation OXPHOS)并為細(xì)胞提供能量的主要場(chǎng)所。而D環(huán)區(qū)(D-LOOP區(qū))是線粒體DNA(mtDNA)的主要非編碼區(qū),占全部mtDNA的6%左右,位置在16028bp~577bp(tRNApro和tRNAphe之間),富含A—T堿基,遺傳

2、上是高變區(qū),mtDNA的重鏈和輕鏈復(fù)制起始點(diǎn)均位于此區(qū)內(nèi),主要是調(diào)控mtDNA的轉(zhuǎn)錄和復(fù)制,研究表明D-環(huán)的突變速率約為整個(gè)序列的10倍。D環(huán)區(qū)具有高度多態(tài)性,這種高度多態(tài)性反映了線粒體的高度突變性,已經(jīng)有大量的研究工作證實(shí),該區(qū)是mtDNA突變的熱點(diǎn)區(qū)域。近年來(lái),對(duì)于人類mtDNA的突變研究成為醫(yī)學(xué)界尤其是腫瘤的發(fā)生發(fā)展的研究熱點(diǎn),但對(duì)于急性白血病患者mtDNA D-LOOP區(qū)的突變情況尚未見有報(bào)道。本研究的主要目的是,利用PCR技術(shù)

3、及T載體克隆技術(shù)提取并擴(kuò)增急性白血病患者骨髓單個(gè)核細(xì)胞中mtDNA D-LOOP區(qū)片段全長(zhǎng),用直接測(cè)序法測(cè)定急性白血病患者mtDNA D-LOOP區(qū)DNA序列,探索其有無(wú)突變及突變類型。并總結(jié)急性白血病患者D-LOOP區(qū)的突變規(guī)律,探討其發(fā)生的可能機(jī)制及后果,為急性白血病的發(fā)病機(jī)制、診斷及治療提供分子生物學(xué)方面的理論參考。研究方法 選擇20例急性白血病患者的經(jīng)EDTA抗凝的骨髓液,首先以淋巴細(xì)胞分離液用差速離心法分離骨髓單個(gè)核細(xì)胞,用酚