異體反應(yīng)性NK細(xì)胞誘導(dǎo)移植后供者免疫耐受形成和抑制肺癌復(fù)發(fā)的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、博士學(xué)位論文DOCTORALDISSERTATION跑文題目：異體反應(yīng)性NK細(xì)胞誘導(dǎo)移植后供者免疫ToTLE耐受形成和抑制肺癌復(fù)發(fā)的實(shí)驗(yàn)研究E、llrrl州lalInl(|Y【Ⅲ^mrrtm、htP|_1‰hmg【_JnlIIjlrfamI：dlflfidi#，dHHrI_r‘PafternⅥ11HⅢ帥I_】iI勰～級(jí)學(xué)科：臨床醫(yī)學(xué)二級(jí)學(xué)科：腫瘤學(xué)j一一Z一，i論文作者：于津浦，‘：i吐’：：指導(dǎo)教師郝希山教授薹i～一F一二～一一—二娶

2、二剽h：r鬻≮囂蛐。0乏～天津醫(yī)科大學(xué)博士學(xué)位論文并殺傷C57BL／6細(xì)胞的Ly49A細(xì)胞占(2224_295)％。效靶比為20：1時(shí)，AlloNK對(duì)Yac—l、LLC和C57BL／6小鼠細(xì)胞的殺傷率分別為(6227736)％，(5986624)％和(5483526)％。與其他非清髓性預(yù)處理方案，如65GyTBI組、化療組和AutoNK化療組相比，AlloNK化療組不僅對(duì)骨髓毒性小，骨髓和脾臟的有核細(xì)胞在710天迅速恢復(fù)至正常水平；而且

3、可顯著提高移植后的供者嵌合率，移植后21天后逐漸穩(wěn)定在骨髓(2870590)％，脾臟(46405oo)％，顯著高于65GyTBI組的(608046)％、化療組的(102240)％和AutoNK化療組的(801_212)％，并持續(xù)3個(gè)月(P005)。與化療組相比，AUoNK化療組出現(xiàn)的GVHD反應(yīng)輕微，僅有50％(5／10)受鼠出現(xiàn)體重減輕，AlloNK化療組的肝臟、小腸、腎臟及皮膚的病理切片均未見明顯的組織損傷。AlloNK化療組接受D

4、LI的小鼠，回輸后8h24h供者淋巴細(xì)胞在受者肺臟、脾臟、腎臟中明顯蓄積，且濃度最高，時(shí)間最長(zhǎng)。利用重復(fù)測(cè)量法發(fā)現(xiàn)，AlloNK化療組復(fù)發(fā)腫瘤明顯小于化療組(P001)。至實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)AlloNKDLI組腫瘤明顯小于不給治療的AlloNKPBS組和化療DLI組，腫瘤抑制率分別為(7062375)％，’(5087607)％和(5594398)％(PO05)，且鏡下可觀察到腫瘤局部有較多的淋巴細(xì)胞浸潤(rùn)。AlloNKDLI組中MCP一1、IL1

5、7、IL12、和MCP一5較對(duì)照組分別升高156倍、136倍、120倍和117倍；而IL10降低175倍。MLR結(jié)果顯示，與正常C57小鼠相比，化療組和AlloNK化療組的增殖指數(shù)(SI)降低，而AlloNK化療組降低程度尤甚(氏O05)，其中增殖抑制作用主要來(lái)源于CD4T細(xì)胞中的CD4CD25T細(xì)胞，并呈劑量效應(yīng)依賴關(guān)系。ELISA法檢測(cè)發(fā)現(xiàn)，AlloNK化療組的CD4T細(xì)胞和CD4CD25T細(xì)胞可以顯著抑制供者特異性IFNY分泌。流

6、式細(xì)胞儀檢測(cè)結(jié)果示AIIoNK化療組在移植后23d脾臟中出現(xiàn)一群新生的CD4c025cDl27。Treg細(xì)胞，而化療組組未見。熒光定量PCR擴(kuò)增結(jié)果顯示AlloNK化療組CD4CD25T細(xì)胞中Foxp3表達(dá)顯著升高，高于化療組(尸005)，而IL一2、IFNY和IL4的表達(dá)低于化療組(P005)。流式細(xì)胞儀檢測(cè)表明Allo—NK化療組移植后14d的胸腺CDllcDC細(xì)胞成熟度明顯低于化療組，與正常C57BL／6小鼠CD3T細(xì)胞共孵育5d