骨髓增生異常綜合征發(fā)病機制及去甲基化治療的相關研究.pdf

1、第一部分BLU、Dab2和DLEC1基因甲基化在骨髓增生異常綜合征中的研究
　　 目的:通過對79例初診和13例經(jīng)地西他濱治療的MDS患者BLU、Dab2和DLEC1基因甲基化狀態(tài)及其與臨床特征之間關系的研究，明確BLU、Dab2和DLEC1基因在MDS發(fā)生、發(fā)展中的作用。
　　 方法:通過甲基化特異性PCR和亞硫酸氫鹽測序方法檢測MDS骨髓單個核細胞中BLU、Dab2和DLEC1基因的甲基化狀態(tài)，采用實時熒光定量PCR

2、和Western blot方法檢測BLU、Dab2和DLEC1基因的表達。
　　 結果:MDS患者骨髓BLU、Dab2和DLEC1基因的甲基化率分別為43.0％(34/79)、50.6％(40/79)和46.9％(37/79), BLU、Dab2和DLEC1基因的表達缺失與其發(fā)生甲基化相關。RA/RARS/5q-組和RAEB-1/RAEB-2組間的BLU、Dab2和DLEC1基因甲基化率存在顯著差異。中危-2/高危組BLU、Da

3、b2和DLEC1基因甲基化率顯著高于低危/中危-1組MDS病例。Dab2基因啟動子甲基化陽性率與IPSS積分、染色體核型相關。地西他濱治療可部分恢復因甲基化而表達缺失的BLU、Dab2和DLEC1基因的表達。
　　 結論:BLU、Dab2和DLEC1基因是MDS中較為特征性出現(xiàn)的高度甲基化基因，尤其是在中危-2/高危組病例，地西他濱治療可部分逆轉BLU、Dab2和DLEC1基因甲基化，使其表達恢復。BLU、Dab2和DLEC1基

4、因在MDS疾病的發(fā)生、發(fā)展中具有重要作用。
　　 第二部分地西他濱對骨髓增生異常綜合征骨髓單個核細胞作用的初步研究
　　 目的:骨髓增生異常綜合征(myelodysplastic syndrome，MDS)是一組異質性的惡性克隆性造血干細胞疾病，胞嘧啶核苷類似物地西他濱治療MDS已取得較好療效，約50％的病例取得治療反應，治療相關毒性低，但其作用機制仍不明確。因此，本研究探討地西他濱對MDS骨髓單個核細胞的體外影響及其可

5、能的機制。
　　 方法:MDS來源骨髓單個核細胞經(jīng)不同濃度地西他濱處理后，應用CCK-8法觀察細胞增殖狀態(tài)，甲基纖維素培養(yǎng)基培養(yǎng)觀察集落形成能力，Annexin V-FITC/7-AAD雙染法了解細胞凋亡，碘化丙啶(propidium iodide，PI)單染法測定細胞周期，應用實時定量RT-PCR檢測地西他濱處理前后p15基因轉錄水平的變化，采用甲基化特異性PCR法和亞硫酸氫鹽修飾后測序法檢測p15基因啟動子區(qū)CpG島甲基化水

6、平變化。
　　 結果:在0～5μM濃度范圍內，地西他濱抑制MDS來源的骨髓單個核細胞的增殖作用逐漸增加，但在此濃度范圍內未發(fā)現(xiàn)有明顯促凋亡作用和細胞周期調節(jié)作用;研究病例骨髓單個核細胞經(jīng)3μM地西他濱處理后，集落形成能力減弱;地西他濱處理前MDS病例p15基因啟動子區(qū)CpG島甲基化率為58.3％(7/12)，經(jīng)地西他濱處理72h后，其甲基化程度降低，3例病例在3μM地西他濱作用下MSP檢測結果轉為陰性，mRNA表達水平較前顯著增

7、加。
　　 結論:地西他濱在對MDS來源骨髓單個核細胞具有生長抑制作用，隨濃度增加抑制率增加，而未發(fā)現(xiàn)顯著促凋亡作用;經(jīng)地西他濱處理后的骨髓單個核細胞的集落形成減少;地西他濱處理可部分恢復因甲基化沉默的p15基因的表達。
　　 第三部分微小RNA-155在MDS中的表達及其臨床意義
　　 目的:研究微小RNA-155(miR-155)在MDS患者骨髓單個核細胞中的表達，分析miR-155的表達與MDS臨床特征的關